小鼠生殖细胞特异性转录因子SOHLH1对Sox30基因表达调控的研究
发布时间：2021-03-23 23:30
目的:雄性生殖细胞从具有有丝分裂活性的原始生殖细胞发育为成熟精子的过程被称为精子发生。精子发生起源于精原干细胞,分为精原细胞的有丝分裂期、精母细胞的减数分裂期和精子形成期三个阶段。精原细胞经历有丝分裂后在精子形成期发生一系列复杂的结构重塑最终形成成熟精子。许多与精子形成期相关的基因在雄性生殖细胞发育的早期如精原细胞中已经开始转录,此时转录的m RNA在细胞发育至后期时才被翻译为蛋白质并发挥功能。精卵发生特异表达螺旋-环-螺旋转录因子1（Spermatogenesis-and oogenesis-specific b HLH transcription factor-1,Sohlh1）在雄性生殖细胞中主要表达于A1-A4型精原细胞,编码蛋白含有一个b HLH结构域,可以形成异二聚体或同型二聚体与DNA上的E-box序列CANNTG结合调控下游基因的表达。本课题组前期研究发现Sohlh1基因敲除雄性小鼠不育,精原细胞发育及分化异常导致进入减数分裂的精母细胞减少,无成熟精子产生。基因芯片检测结果显示出生后7天野生型雄鼠与Sohlh1基因敲除雄鼠睾丸组织中Sox30、Rnf17等精子发生中关键...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
中国医科大学硕士学位论文截短片段 DNA 序列，见图 3。综合分析 Sox30 启动子序列、pMD18-T Vector 和 pGL3.0-Basic Vector 上的共用酶切位点，选取启动子上游引物 5′端的 KpnⅠ酶切位点和位于下游引物 3′端的 HindIII 酶切位点，利用双酶切法获得启动子序列，并将目的序列连接到pMD18-T Vector 和 pGL3.0-Basic Vector 上，载体信息见图 4。
图 4. pMD18-T Vector 结构示意图及 pGL3.0-BasicVector 结构示意图 Sox30 启动子全长和启动子截短序列的 pMD18-T-Sox30 质x30 基因启动子片段的扩增及纯化 DNA 为 PCR 反 应 的 扩 增 模 板 ， 使 用 NEB Q5DN-Fidelity DNA Polymerase）扩增 Sox30 基因的启动子全长及截短片应体系：剂 使用量 8High-Fidelity DNA Polymerase 0.5 μlQ5Amplification Buffer 10.0 μlQ5High GC Enhancer 10.0 μlTP（2.5 μM) 4.0 μlrward primer（10 μM） 2.5 μlverse primer（10 μM） 2.5 μl
本文编号：3096607
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中国医科大学硕士学位论文截短片段 DNA 序列，见图 3。综合分析 Sox30 启动子序列、pMD18-T Vector 和 pGL3.0-Basic Vector 上的共用酶切位点，选取启动子上游引物 5′端的 KpnⅠ酶切位点和位于下游引物 3′端的 HindIII 酶切位点，利用双酶切法获得启动子序列，并将目的序列连接到pMD18-T Vector 和 pGL3.0-Basic Vector 上，载体信息见图 4。
图 4. pMD18-T Vector 结构示意图及 pGL3.0-BasicVector 结构示意图 Sox30 启动子全长和启动子截短序列的 pMD18-T-Sox30 质x30 基因启动子片段的扩增及纯化 DNA 为 PCR 反 应 的 扩 增 模 板 ， 使 用 NEB Q5DN-Fidelity DNA Polymerase）扩增 Sox30 基因的启动子全长及截短片应体系：剂 使用量 8High-Fidelity DNA Polymerase 0.5 μlQ5Amplification Buffer 10.0 μlQ5High GC Enhancer 10.0 μlTP（2.5 μM) 4.0 μlrward primer（10 μM） 2.5 μlverse primer（10 μM） 2.5 μl
本文编号：3096607
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3096607.html
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