大肠杆菌O157：H7免疫HCR信号放大检测及沙门菌逻辑编码免疫层析高通量分群的研究

发布时间：2021-03-25 19:00

　　大肠杆菌O157:H7和沙门菌都是常见的食源性致病菌。大肠杆菌O157:H7传染剂量低至10个菌,因此建立一种高灵敏的大肠杆菌O157:H7检测方法是必要的;沙门菌的血清群较多且难以分型,给沙门菌的溯源工作带来了较大难度,因此建立一种快速高通量的沙门菌分群方法是必要的。本文中,我们建立了大肠杆菌O157:H7的高灵敏检测方法和沙门菌高通量分群方法。杂交链式反应（hybridization chain reaction,HCR）是一种不需要酶的等温核酸自组装反应。近年来,HCR被广泛应用在检测信号放大的研究中。本文第二章,我们将免疫学与HCR相结合,建立了一种免疫HCR去检测大肠杆菌O157:H7。我们发现当HCR的引发链（Initiator）和抗体共同标记于一个乳胶微球上,抗体会干扰引发链（Initiator）参与HCR反应,导致了阳性信号不强,灵敏度不高;我们设计引入一条互补链（C-Initiator）,将互补链和抗体标记在同一个乳胶微球上,而引发链（Initiator）单独标记在另一个乳胶微球上。这种策略降低了抗体对引发链（Initiator）参与HCR反应的干扰,从而增强信号,提... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

枝状HCR的原理

第二章 基于双球的大肠杆菌 O157:H7 免疫 HCR 信号放大检测方法的建立不同于基于单球的免疫 HCR 放大,引发链和抗体（mAb）同时标记在一个乳胶微球（latex nanoparticles，LNPs）上。抗体（mAb）干扰引发链与发夹的 HCR反应，导致荧光信号不强，灵敏度不高；在本研究中，我们将抗体与互补链标记在同一个乳胶微球上，而引发链则单独标记在另一个乳胶微球上。这种双球策略不仅提高引发链的载量，也降低了抗体（mAb）对引发链的干扰，提高引发效率和检测方法的灵敏度。

第二章 基于双球的大肠杆菌 O157:H7 免疫 HCR 信号放大检测方法的建立2.4.1.2 核酸序列的电泳验证我们使用了琼脂糖凝胶电泳验证是否能够发生我们所设计的 HCR 反应。结果如图 2.3 所示：在没有引发链存在的情况下（图 2.3 泳道 1-4），H1 和 H2 不能够相互引发；当引发链由高浓度变为低浓度时候（图 2.3 泳道 5-9），HCR 产物中短链（1000bp 以下）的含量越来越少，当引发链浓度过低时（图 2.3 泳道 9），大部分发卡没有参与 HCR 反应；从图 3.3 泳道 10，我们可以得知互补链不能够引发 H1 和 H2。

【参考文献】：
期刊论文
[1]中国六省份零售整鸡中沙门菌血清型分布和耐药性特征研究[J]. 胡豫杰,赫英英,王晔茹,刘畅,王美美,甘辛,王伟,闫韶飞,白瑶,彭子欣,李凤琴,徐进.  中华预防医学杂志. 2018 (04)
[2]免疫磁分离结合胶体金免疫层析法快速检测大肠杆菌O157∶H7[J]. 崔希,熊齐荣,熊勇华,山珊,赖卫华.  分析化学. 2013(12)



本文编号：3100153