基于L5178Y细胞体外Pig-a基因突变试验方法的建立与初步探索
发布时间：2021-04-09 17:33
利用小鼠淋巴瘤细胞L5178Y tk+/--3.7.2C和阴性化合物Glc、NaCl及阳性化合物EMS、ENU、4-NQO、B （a） P建立并验证基于哺乳动物细胞的体外Pig-a基因突变检测方法。计算细胞相对倍增速率评价细胞毒性,抗体标记突变型细胞确定流式检测模板,L5178Y细胞经EMS处理后第4、8、12、16、20天检测Pig-a基因突变频率,确定最大突变频率发生时间点,免疫荧光技术检测CD90蛋白在细胞中的定位情况,采用PCR方法进行突变位点分析。结果表明:（1） Glc、NaCl、EMS、ENU、B （a） P、4-NQO所设浓度组RPD均大于50%。（2）基因突变频率在给药后第8天出现峰值。Glc和NaCk致Pig-a基因突变频率均小于200×10-6,各浓度组与溶剂对照组间不存在显著性差异（P>0.05）,EMS、ENU、B （a）P、4-NQO均可引起Pig-a基因突变频率增加,且与溶剂对照组相比存在显著性差异。（3）免疫荧光成像显示突变型细胞表面无CD90蛋白,野生型细胞正常表达CD45,CD90蛋白。（4）基因突变...
【文章来源】：生物技术通报. 2020,36(01)北大核心CSCD
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
不同受试物给药24 h或4 h后的RPD（±s,n=3)
EMS、ENU、NaCl、Glc作用24h,B(a)P、4-NQO给药4 h表达8 d Pig-a基因突变频率检测结果（图5-6）显示，非S9代谢活化条件下，EMS浓度大于100μg/mL时，Pig-a基因突变率与溶媒对照组相比，存在显著性差异（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001），且呈浓度递增趋势；ENU浓度大于125μg/mL时，Pig-a基因突变率与溶媒对照组相比，存在显著性差异（**P<0.01,***P<0.001），且呈浓度递增趋势。图4 Pig-a基因突突变频率表达周期
图3 流式突变区域确认与质控图S9代谢活化条件下，当B(a)P浓度大于2.0μg/mL时，Pig-a基因突变率与溶媒对照组相比，存在显著性差异（*P<0.05,***P<0.001），且成浓度递增趋势。当4-NQO浓度大于0.075μg/mL时Pig-a基因突变率与溶媒对照组相比，存在显著性差异（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001），且成浓度递增趋势。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于TK6细胞的体外PIG-A基因突变检测方法的建立[J]. 李若婉,周长慧,黄鹏程,常艳. 癌变·畸变·突变. 2019(03)
[2]亚硝基脲对DNA损伤作用的研究进展[J]. 白宝清,赵丽娇,钟儒刚. 化学通报. 2010(03)
本文编号：3128031
【文章来源】：生物技术通报. 2020,36(01)北大核心CSCD
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
不同受试物给药24 h或4 h后的RPD（±s,n=3)
EMS、ENU、NaCl、Glc作用24h,B(a)P、4-NQO给药4 h表达8 d Pig-a基因突变频率检测结果（图5-6）显示，非S9代谢活化条件下，EMS浓度大于100μg/mL时，Pig-a基因突变率与溶媒对照组相比，存在显著性差异（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001），且呈浓度递增趋势；ENU浓度大于125μg/mL时，Pig-a基因突变率与溶媒对照组相比，存在显著性差异（**P<0.01,***P<0.001），且呈浓度递增趋势。图4 Pig-a基因突突变频率表达周期
图3 流式突变区域确认与质控图S9代谢活化条件下，当B(a)P浓度大于2.0μg/mL时，Pig-a基因突变率与溶媒对照组相比，存在显著性差异（*P<0.05,***P<0.001），且成浓度递增趋势。当4-NQO浓度大于0.075μg/mL时Pig-a基因突变率与溶媒对照组相比，存在显著性差异（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001），且成浓度递增趋势。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于TK6细胞的体外PIG-A基因突变检测方法的建立[J]. 李若婉,周长慧,黄鹏程,常艳. 癌变·畸变·突变. 2019(03)
[2]亚硝基脲对DNA损伤作用的研究进展[J]. 白宝清,赵丽娇,钟儒刚. 化学通报. 2010(03)
本文编号：3128031
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3128031.html
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