柠条锦鸡儿WRKY转录因子的筛选及功能初步分析

发布时间：2021-04-09 19:36

　　柠条锦鸡儿是豆科植物,生长在荒漠或半荒漠地区,具有降血脂,抗氧化以及抗癌等生物学作用,同时,对环境的生态适应性较高,抗逆性极强,具有重要的研究价值和经济价值。为了挖掘柠条锦鸡儿中抗旱相关基因资源,实验室前期构建了苗期干旱处理的cDNA文库并进行了高通量测序。通过生物信息学分析发现了49个干旱上调表达基因,其中包含了6个WRKY转录因子。在此基础上,本研究以拟南芥Col-0生态型为受体材料,通过构建表达载体、转化拟南芥、获得转基因拟南芥纯合株系和干旱相关表型测定,获得了如下研究结果:（1）将6个WRKY转录因子的序列和拟南芥基因组数据库进行比对,根据序列的同源性比对结果将6个WRKY转录因子分别命名为CkWRKY2,CkWRKY4,CkWRKY20,CkWRKY23,CkWRKY51和CkWRKY75。这些基因的cDNA编码区全长分别为1614bp,1386bp,1527bp,1107bp,618bp和951bp,分别编码537个,461个,508个,368个,205个和316个氨基酸。根据WRKY结构域数目和锌指结构类型,将6个WRKY转录因子分为3类,其中,CkWRKY2,CkWRK... 

【文章来源】：海南师范大学海南省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

WRKY转录因子的分类（文锋等，2017）

图 1.2 一个月大苗龄柠条锦鸡儿干旱处理前后表型及高通量测序差异基因（a）图为干旱处理前后植株表型变化；（b）图为干旱植株较未干旱植株结果。Figure 1.2 Graph showing the difference between phenotype and high-thrsequencing after drought treatment in Caragana korshinskii . (a) the phechanges of plants before and after drought treatment.; (b) the sequencing redrought plants compared with non-drought plants.1.6 研究目的及意义WRKY 转录因子是一大类调节蛋白，它们在响应生物和非生物胁迫重要的作用（Guo et al., 2018）。WRKY 家族还是一类高度保守的转录因子（a） （b）

海南师范大学硕士学位论文多序列比对采用 geneDoc（下载地址：https://github.com/karlnicholas/GeneDo软件比对，构建系统进化树使用 MEGA7.0 软件。2.2.2.3 植物 WRKY 结构域的保守性分析利用 geneDoc 进行 WRKY 多序列比对，比对结果进行 WRKY 结构域的保守性分析。2.2.3 构建表达载体2.2.3.1 双酶切获得载体骨架本研究选用 35S-Red-Kan，采用 In-Fusion 同源重组构建植物表达载体。用限制性内切酶 EcoRI 和 XmaI 对 35S-Red-Kan 载体质粒进行双酶切。获得双酶切骨架，回收骨架用于目的片段的连接。


本文编号：3128198