上调OCT4基因表达对人骨髓间充质干细胞的iPSC相关转录因子表达的影响

发布时间：2021-04-13 19:48

　　目的:探讨OCT4基因过表达对人骨髓间充质干细胞（human bone marrow derived mesenchymal stem cells,h BMMSC）i PSC相关转录因子（c MYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2）表达的影响,为从骨髓造血微环境的角度探索血液系统疾病如白血病、再生障碍性贫血等的发生机制提供实验依据。方法:首先构建重组质粒pcDNA3.1-OCT4表达载体,通过脂质体转染的方式将上述表达质粒导入第3-4代hBMMSC,分别通过PCR及流式细胞术对OCT4 mRNA和OCT4蛋白的过表达进行验证,然后经G418抗性加压下有限稀释和连续亚克隆的方法筛选出稳定表达OCT4的细胞（hBMMSC-OCT4）,分别通过RT-PCR和流式细胞术测定iPSC相关转录因子（cMYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2）mRNA和蛋白的表达,观察OCT4过表达对iPSC相关转录因子表达的影响。结果:成功构建了携带OCT4的重组表达质粒pcDNA3.1-OCT4;通过有限稀释和连续亚克隆的方法筛选出稳定表达OCT4的细胞（hBMMSC-OCT4）;流式细胞... 

【文章来源】：中国实验血液学杂志. 2020,28(04)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
材料和方法
    试剂与仪器
    OCT4基因序列的人工合成
    重组质粒pcDNA3.1-OCT4的构建及酶切鉴定
    重组质粒转染hBMMSC及阳性克隆的鉴定（按照Lipofectamine?2000的说明书进行操作）
    人骨髓间充质干细胞（hBMMSC）的培养
    OCT4及其它干性转录因子（c MYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2）mRNA表达的RT-PCR测定
    瞬时转染和稳定表达细胞中OCT4 m RNA相对表达量的real-time PCR测定
    干性转录因子（c MYC、KLF4、Lin28、NANOG、OCT4、SOX2）蛋白表达的流式细胞术测定
    统计学分析
结果
    重组质粒pcDNA3.1-OCT4的构建及酶切鉴定
    稳定高表达OCT4的hBMMSC（hBMMSC-OCT4）的建立
    hBMMSC-OCT4中干性相关转录因子的表达变化hBMMSC-OCT
    hBMMSC-OCT4中干性相关转录因子间的相关性分析
讨论



本文编号：3135902