HbTCTP及其截短体酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

发布时间：2021-04-15 12:01

　　为进一步鉴定橡胶树翻译控制肿瘤蛋白（HbTCTP）与橡胶延伸因子1 （HbREF1）互作的分子区域,构建Hb TCTP及其截短体的诱饵载体。本研究利用RT-PCR技术从橡胶树胶乳中扩增出包含HbTCTP不同结构域的片段,克隆到p GBKT7表达载体,通过酶切、菌落PCR和测序鉴定后,转化酵母Y2HGold感受态细胞,检测诱饵蛋白是否具有自激活作用和毒性。结果显示,成功构建6个包含HbTCTP不同结构域的诱饵载体,且诱饵载体对酵母宿主细胞无毒性和无自主激活报告基因的功能。本研究结果为进一步筛选HbTCTP与HbREF1互作的分子区域及阐明HbTCTP的功能提供科学依据。 

【文章来源】：分子植物育种. 2020,18(16)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

Hb TCTP及其截短体的PCR产物

重组质粒酶切鉴定

将转化重组诱饵质粒和pGBKT7质粒的Y2HG-lod菌液稀释后涂布于SDO固体平板上，30℃培养3～5 d后，SDO平板上转化重组诱饵质粒的酵母菌落个数和转化空载体的菌落个数基本相同，菌落直径均大于2 mm。分别挑取SDO平板上生长的酵母菌落，接种于SDO液体培养基中，30℃摇菌培养24 h后测得其OD600均大于0.8(表1)，说明重组诱饵质粒对酵母细胞没有毒性，以上结果表明构建的诱饵载体可用于下一步HbTCTP与HbREF1互作区域酵母双杂交筛选。2 讨论

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3139296