基于CRISPR/Cas蛋白的核酸恒温检测新方法研究

发布时间：2021-04-16 22:53

　　核酸分析检测对生命科学基础研究、人类健康具有重要意义。传统聚合酶链式反应（PCR）依赖热循环仪,不适合在偏远、贫穷、没有相关仪器的地方进行检测。核酸等温扩增技术不依赖于精良设备,在现场和临床快速诊断中展示了良好的应用前景。然而,当前等温扩增技术在灵敏度、特异性和适用范围方面仍存在着一些问题。CRISPR/Cas系统作为一种源自原核生物获得性免疫系统的基因定点编辑技术,自发现以来吸引了大量科研关注,近年来被广泛应用于临床核酸分析检测及生物传感技术。本文利用CRISPR/Cas蛋白独特的核酸切割活性,分别开发了 microRNA快速检测和核酸恒温扩增检测新方法。首先,我们利用Cas12a蛋白的反式切割活性,开发了一种多酶级联反应方法应用于microRNA（miRNA）特异性检测。靶标miRNA存在时,RNA连接酶引发连接反应生成包含T7启动子的转录模板,T7 RNA聚合酶转录合成大量含有crRNA和8-17E脱氧核酶底物的RNA序列,8-17E脱氧核酶特异性切割RNA序列生成crRNA和与靶标miRNA序列相同的RNA。crRNA与Cas12a结合后,反应体系中游离的双链DNA分子特异性激... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１血液中的无细胞核酸［６１

?°Ｃ）来生成靶标。??Ａ?Ｕ＿－ＵＬ－＿－Ｌ二二丄ｍ＿＿＿＝ａｇ??Ｉ??ｒ—?，：３］、．七?＊???????■?ｆｔｌｎａｍ?ｒｕ？ｕｈＮＨ?ｍｈＩ??二〈一??ｒ?ｓｉＨｉＭａＢＭａＢａｉａｉａＢＭａａａａａｉａａＢａａＢｉＢＢＢｉｉａｉａｉＭａ＊?？？??Ｉ?Ｍｍ？ｉ?ｎｔＭａｔＭＭ?ｍ４??．－???＾一?＿??？?１???■％?＾??暴??暴??暴?ｒＭ?ｈｆａ—?ｒ％ｌ?ｉｒ??Ｌｕ口??”?Ｉ—??——，?———??图１．２?ＳＤＡ反应的原理图間。??Ｆｉｇ．?１．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ＳＤＡ?ｒｅａｃｔｉｏｎ．??

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本文编号：3142316