猪源GⅠ JEV弱毒株SD-F120安全性和免疫原性研究

发布时间：2021-04-19 12:58

　　日本脑炎（Japanese encephalitis,JE）是亚洲地区常见的一种病毒性脑炎,是由日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一种蚊媒传播的人兽共患传染病,猪是最主要的传染源和扩增宿主。我国是一个养猪大国,JE在猪群中的流行相当普遍,感染后虽不会导致较高的死亡率,但会导致公猪睾丸炎和妊娠母猪流产,给养猪业造成巨大的经济损失。本研究通过采用RT-PCR、间接免疫荧光和病毒分离等实验室技术对上海市奉贤区某猪场疑似感染JE的病猪样品进行检测,从流产胎儿脑组织中分离到一株JEV,命名SD12株,并对其全基因进行测序分析,构建遗传进化树,鉴定为GⅠ JEV。在此基础上建立了小鼠感染模型,研究其在小鼠体内的动态分布,测定病毒滴度及生物学特性并对其分子进化情况进行了分析。鉴于目前我国GⅠ/Ⅲ JEV共同流行的趋势,为快速、高效检测临床和实验样本中的JEV载量及其基因型,本研究通过对WHV、DENV、ZIKV和GⅠ/Ⅲ JEV毒株序列比对分析,设计特异的探针,建立了区分GⅠ/Ⅲ JEV的Taq Man RT-q PCR方法。经验证该方法具有良好的灵... 

【文章来源】：长江大学湖北省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
    1 引言
        1.1 乙型脑炎病毒概述
        1.2 乙型脑炎病毒基因组结构及编码蛋白功能概述
        1.3 乙型脑炎病毒基因型及其转变研究概述
        1.4 乙型脑炎病毒疫苗研究与使用概述
    2 研究目的与意义
第二章 GⅠ JEV分离、鉴定与分子特征分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 RT-PCR鉴定
        2.2 病毒分离
        2.3 间接免疫荧光染色试验
50和TCID₅₀">        2.4 LD₅₀和TCID50

        2.5 序列分析
        2.6 遗传进化分析
    3 讨论
第三章 GⅠ/Ⅲ JEV TaqMan RT-qPCR检测方法的建立
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 TaqMan RT-qPCR标准曲线
        2.2 TaqMan RT-qPCR特异性检验
        2.3 TaqMan RT-qPCR的灵敏度和重复性
        2.4 临床样本检测
    3 讨论
第四章 GⅠ SD12 在 C57BL/6 小鼠体内感染模型建立
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的临床症状
        2.2 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的生存曲线
        2.3 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的脑组织病理切片
        2.4 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的组织病毒检测
    3 讨论
第五章 JEV SD-F120 株在小鼠体内安全性和免疫原性研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 GⅠ JEV SD12 株在小鼠体内感染剂量筛选
        2.2 GⅢ JEV NJ28 株在小鼠体内感染剂量筛选
        2.3 GⅢ JEV SA14-14-2 株在小鼠体内交叉保护
        2.4 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠体内交叉保护
        2.5 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠体内安全性
        2.6 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠体内免疫原性
    3 讨论
第六章 JEV SD-F120 株在猪体内安全性和免疫原性研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 GⅠ JEV SD-F120 株在猪体内安全性
        2.2 GⅠ JEV SD-F120 株在猪体内免疫原性
    3 讨论
全文总结
参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪乙型脑炎的病状与防控[J]. 蔡越,周晓蔓.  今日畜牧兽医. 2019(10)
[2]2012-2016年毕节市自然疫源及虫媒传染病流行病学特征分析[J]. 吴芳,陈淑媛,刘国琴.  现代预防医学. 2019(01)
[3]猪乙型脑炎灭活疫苗安全性与免疫效力的研究[J]. 赖月辉,牛晓芸,牛贝贝,朱炜斌,李嘉爱,黄秋雪,齐冬梅.  广东畜牧兽医科技. 2018(04)
[4]中华按蚊源日本脑炎病毒的分离鉴定及其分子特征的分析[J]. 刘茜倩,魏建超,钟登科,吴亚玲,石坤,张克龙,陆美林,肖长广,李蓓蓓,刘珂,邵东华,邱亚峰,石元元,马志永,范红结.  中国兽医科学. 2017(01)
[5]乙型脑炎病毒及其疫苗最新研究进展[J]. 郭杨,林华.  中国生物工程杂志. 2015(10)
[6]Flexible空间扫描统计量在甘肃省自然疫源性疾病空间聚集性研究中的应用[J]. 魏孔福,刘新凤,任晓卫,刘东鹏,刘海霞,郑芸鹤,成瑶,蒋小娟,杨筱婷,李治平,苟发香,孟蕾.  中国媒介生物学及控制杂志. 2015(05)
[7]乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定性分析[J]. 杨邦玲,王洪强,王凯,王晓丹,李玉华.  中国生物制品学杂志. 2014(12)
[8]Molecular Characterization of Full-length Genome of Japanese Encephalitis Virus Genotype V Isolated from Tibet, China[J]. LI Ming Hua,FU Shi Hong,CHEN Wei Xin,WANG Huan Yu,CAO Yu Xi,LIANG Guo Dong.  Biomedical and Environmental Sciences. 2014(04)
[9]我国流行性乙型脑炎研究近况[J]. 蔡宝祥.  畜牧与兽医. 2012(07)
[10]猪乙型脑炎的诊断与综合防控[J]. 陈宏.  养殖技术顾问. 2010(08)

硕士论文
[1]猪乙型脑炎病毒灭活疫苗佐剂筛选及免疫效果评估[D]. 刘洪明.四川农业大学 2017
[2]猪乙型脑炎病毒的分离鉴定、致弱及间接ELISA检测方法的建立[D]. 张丽颖.南京农业大学 2011
[3]河南省乙型脑炎病毒的分离鉴定及分子特性分析[D]. 杨猛.河南农业大学 2011



本文编号：3147597

suoshi