GPR39在脊椎动物中的适应性进化和功能研究
发布时间：2021-04-28 04:44
G蛋白偶联受体（GPCRs）广泛参与了脊椎动物的生理与病理过程,因而一直是新药发现及研究的最重要靶点。在800多个GPCRs中,孤儿GPCRs是一类内源性配体未知的GPCRs,被认为是药物研发的潜在靶点。因此,鉴定其内源性配体进行去孤儿化具有重要的临床意义,广泛受到学者的关注。然而,越来越多研究证明GPCR（包括一些孤儿的受体）,可以配体非依赖的形式组成型的激活G蛋白信号。G蛋白偶联受体39（GPR39）就是一类具有组成型活性的孤儿GPCR。在本文中,我们首先对GPR39进行了脊椎动物的系统进化分析和正选择分析,发现GPR39在脊椎动物的不同分支经历了正选择,而且不同物种的正选择位点位于受体的不同结构域。其次,我们证明人GPR39、鸡GPR39、蛙GPR39和斑马鱼GPR39可以配体非依赖的形式组成型激活Gq和G12信号通路。与其他物种相比,斑马鱼GPR39也可以配体非依赖的形式组成型激活Gs信号通路,并且斑马鱼的H2967.35位点是Gs信号通路活性的关键位点。我们进一步发现不同物种的正选择位点对不同的G蛋白信号通路有不同的影响。我们的结果表明,孤儿受体GPR3...
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 GPCR概述
1.2 GPR39的发现及研究进展
1.3 本研究的目的和意义
第2章 胃饥饿素/神经降压素肽受体亚家族的进化
2.1 实验方法
2.1.1 样本选取
2.1.2 数据分析
2.2 实验结果
2.2.1 胃饥饿素/神经降压素肽受体亚家族的系统发育树分析
2.2.2 胃饥饿素/神经降压素肽受体亚家族选择压力分析
2.2.3 胃饥饿素/神经降压素肽受体亚家族相似性与一致性分析
2.3 讨论
第3章 脊椎动物中不同物种GPR39信号通路研究
3.1 实验材料
3.1.1 主要试剂
3.1.2 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 质粒构建和细胞培养
3.2.2 基因克隆
3.2.3 萤火虫荧光素酶报告基因检测
3.2.4 报告基因抑制剂检测
3.2.5 Western blot实验
3.2.6 细胞内钙离子检测
3.2.7 磷酸化ERK检测
3.2.8 数据分析方法
3.3 实验结果
3.3.1 不同物种GPR39信号通路
3.3.2 G蛋白抑制剂对GPR39组成型活性的影响
3.3.3 GPR39在体内和体外的蛋白表达情况
3.3.4 NTS对不同物种GPR39 刺激作用研究
3.4 讨论
第4章 调控不同物种GPR39组成型活性的关键位点研究
4.1 实验材料
4.1.1 主要试剂
4.1.2 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 点突变实验
4.2.2 不同物种GPR39点突变的萤火虫荧光素酶报告基因检测情况
4.2.3 不同物种GPR39点突变蛋白表达情况
4.2.4 Ballesteros-Weinstein编号方法
4.2.5 数据分析方法
4.3 实验结果
4.3.1 哺乳动物GPR39点突变信号通路和蛋白表达情况
4.3.2 两栖类GPR39点突变信号通路和蛋白表达情况
4.3.3 鱼类GPR39点突变信号通路和蛋白表达情况
4.3.4 Zebrafish-H2967.35位点是Gs信号通路活性的关键位点
4.4 讨论
第5章 结论
5.1 首次发现GPR39在脊椎动物不同分支经历了选择压力
5.2 首次通过实验证明脊椎动物中不同物种GPR39激活的信号通路
5.3 本论文研究展望
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]分子生物学论文中同源性、相似性、一致性使用调查及规范探讨[J]. 宋亚珍,刘枫,潘新社,裴阿卫,南红梅. 中国科技期刊研究. 2013(02)
[2]Gene duplication plays a major role in gene co-option: Studies into the evolution of the motilin/ghrelin family and their receptors[J]. Irwin M. DAVID. Chinese Science Bulletin. 2011(25)
[3]同源性、一致性和相似性的辨析[J]. 宋亚珍,南红梅,刘枫,潘新社,裴阿卫. 中国科技术语. 2011(02)
本文编号：3164825
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 GPCR概述
1.2 GPR39的发现及研究进展
1.3 本研究的目的和意义
第2章 胃饥饿素/神经降压素肽受体亚家族的进化
2.1 实验方法
2.1.1 样本选取
2.1.2 数据分析
2.2 实验结果
2.2.1 胃饥饿素/神经降压素肽受体亚家族的系统发育树分析
2.2.2 胃饥饿素/神经降压素肽受体亚家族选择压力分析
2.2.3 胃饥饿素/神经降压素肽受体亚家族相似性与一致性分析
2.3 讨论
第3章 脊椎动物中不同物种GPR39信号通路研究
3.1 实验材料
3.1.1 主要试剂
3.1.2 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 质粒构建和细胞培养
3.2.2 基因克隆
3.2.3 萤火虫荧光素酶报告基因检测
3.2.4 报告基因抑制剂检测
3.2.5 Western blot实验
3.2.6 细胞内钙离子检测
3.2.7 磷酸化ERK检测
3.2.8 数据分析方法
3.3 实验结果
3.3.1 不同物种GPR39信号通路
3.3.2 G蛋白抑制剂对GPR39组成型活性的影响
3.3.3 GPR39在体内和体外的蛋白表达情况
3.3.4 NTS对不同物种GPR39 刺激作用研究
3.4 讨论
第4章 调控不同物种GPR39组成型活性的关键位点研究
4.1 实验材料
4.1.1 主要试剂
4.1.2 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 点突变实验
4.2.2 不同物种GPR39点突变的萤火虫荧光素酶报告基因检测情况
4.2.3 不同物种GPR39点突变蛋白表达情况
4.2.4 Ballesteros-Weinstein编号方法
4.2.5 数据分析方法
4.3 实验结果
4.3.1 哺乳动物GPR39点突变信号通路和蛋白表达情况
4.3.2 两栖类GPR39点突变信号通路和蛋白表达情况
4.3.3 鱼类GPR39点突变信号通路和蛋白表达情况
4.3.4 Zebrafish-H2967.35位点是Gs信号通路活性的关键位点
4.4 讨论
第5章 结论
5.1 首次发现GPR39在脊椎动物不同分支经历了选择压力
5.2 首次通过实验证明脊椎动物中不同物种GPR39激活的信号通路
5.3 本论文研究展望
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]分子生物学论文中同源性、相似性、一致性使用调查及规范探讨[J]. 宋亚珍,刘枫,潘新社,裴阿卫,南红梅. 中国科技期刊研究. 2013(02)
[2]Gene duplication plays a major role in gene co-option: Studies into the evolution of the motilin/ghrelin family and their receptors[J]. Irwin M. DAVID. Chinese Science Bulletin. 2011(25)
[3]同源性、一致性和相似性的辨析[J]. 宋亚珍,南红梅,刘枫,潘新社,裴阿卫. 中国科技术语. 2011(02)
本文编号：3164825
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3164825.html
