基于Hsp90与LRP-1的SRL-PFAC方法建立及多肽筛选

发布时间：2021-05-06 03:57

　　皮肤是人体防御外界的有效屏障,在抵御细菌侵入,异物入侵以及防止脱水等方面起着重要作用,因此其完整性对于人体来说至关重要。众所周知,伤口愈合是一个复杂的生理过程,而糖尿病,血管疾病,高龄等因素会影响伤口愈合,最终形成慢性伤口。传统观念认为生长因子是促进伤口愈合的主要驱动力,但最终FDA只批准了人重组血小板衍生生长因子BB（PDGF-BB）（becaplermin凝胶）来治疗糖尿病足溃疡,但其疗效不佳,成本高昂,具有致癌风险等弊端逐渐显露。现今全球患有慢性伤口的人口在不断增加,所以我们急需开发出新型效果良好且价格低廉的促进伤口愈合的药物。热休克蛋白90（90 kDa heat shock protein,Hsp90）是一种普遍存在于几乎所有细胞中的分子伴侣,它在进化上高度保守,主要作用是维持细胞内蛋白质稳定。最近众多研究表明当组织受到创伤时,细胞会通过分泌Hsp90α到胞外来影响细胞的迁移,促进伤口愈合。低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP-1）,也称为CD91,是I型跨膜蛋白,主要介导胞吞以及信号通路的传导,近年来越来越多研究证明胞外Hsp90α（eHsp90α）通过LRP-1来传递细胞迁... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词表
第1章 前言
    1.1 热休克蛋白90(Hsp90)
        1.1.1 热休克蛋白
        1.1.2 热休克蛋白90(Hsp90)
        1.1.3 胞外Hsp90(eHsp90)
    1.2 低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)
    1.3 创伤愈合
        1.3.1 皮肤创伤愈合过程
        1.3.2 创伤愈合研究现状
    1.4 海肾荧光素酶双分子互补技术
    1.5 研究内容与意义
第2章 SRL-PFAC方法建立
    2.1 研究背景
    2.2 实验材料与仪器
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 溶液配制
        2.2.4 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 重组质粒的构建
        2.3.2 细胞复苏
        2.3.3 细胞培养及细胞传代
        2.3.4 细胞冻存
        2.3.5 细胞转染
        2.3.6 Western Blot实验及分析
        2.3.7 Renilla Luciferase分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 构建pc DNA3.1(+)-S1
        2.4.2 构建pc DNA3.1(+)-S1-LRP-1 Ⅱ
        2.4.3 构建pc DNA3.1(+)-S1-LRP-1
        2.4.4 测序结果
        2.4.5 Western Blot验证
        2.4.6 荧光素酶活性反应检测SRL-PFAC特异性
    2.5 讨论与小结
第3章 SRL-PFAC 方法有效性测定及多肽筛选
    3.1 研究背景
    3.2 实验材料与仪器
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 Transwell Assay实验分析
        3.3.2 MTS实验分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 SRL-PFAC 具有有效性
        3.4.2 SRL-PFAC筛选出RE-7 与ES-9 可能具有促细胞迁移作用
        3.4.3 RE-7 能够促进HSF细胞迁移
        3.4.4 ES-9 能够促进HSF细胞迁移
    3.5 讨论与小结
结论
参考文献
作者简介及攻读硕士期间的科研成果
致谢



本文编号：3171189