一株产α-半乳糖苷酶的成团泛菌的筛选及酶学性质的研究

发布时间：2021-05-08 09:50

　　α-半乳糖苷酶（α-Galactosidase）是一种通过分解糖分子中非还原性末端的α-1,6-半乳糖苷键从而消除豆类中的抗营养因子,提高营养素利用率的酶,它可以直接水解蜜二糖因此又叫蜜二糖酶。本论文从不同的样品中筛选分离可产α-半乳糖苷酶的微生物,以寻找更多具有不同酶学性质的的α-半乳糖苷酶。从腐乳中分离得到一株可产α-半乳糖苷酶的细菌菌株,并对所得菌株的产酶条件和酶学性质进行研究,主要实验内容及实验结果如下:（1）根据X-α-Gal可在α-半乳糖苷酶的催化下产生蓝色物质的特性,用它做指示剂从豆腐乳中筛选出一株产α-半乳糖苷酶能力较高的菌株,命名为GK。对菌株GK进行16S rDNA、生理生化实验等一系列的鉴定,最终确定其为一株成团泛菌（Pantoea agglomerans）。（2）对菌株GK的生长条件和产酶条件进行研究,发现菌株GK的最适生长pH为6.5、最适生长温度为25℃,而最佳产酶条件为培养基初始pH7.0、装液量250mL/500mL、培养温度20℃、培养时间15h,此时的酶活为14.07U/mL。根据各单因素的实验结果又对温度、pH、装液量做了正交实验来分析各因素之间的... 

【文章来源】：广西科技大学广西壮族自治区

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 α-D-半乳糖苷酶
        1.1.1 α-半乳糖苷酶来源及国内外研究现状
        1.1.2 α-半乳糖苷酶性质
        1.1.3 α-半乳糖苷酶的应用
            1.1.3.1 α-半乳糖苷酶在饲料中的应用
            1.1.3.2 α-半乳糖苷酶在食品领域上的应用
            1.1.3.3 α-半乳糖苷酶在医学方面的应用
            1.1.3.4 α-半乳糖苷酶在其他行业的应用
    1.2 成团泛菌
        1.2.1 成团泛菌的由来
        1.2.2 成团泛菌的作用
    1.3 本实验的主要内容、目的及创新性
        1.3.1 本实验的主要内容
        1.3.2 本试验的目的
        1.3.3 本研究的创新点
第二章 产α-半乳糖苷酶的成团泛菌的筛选和鉴定
    2.1 材料与方法
        2.1.1 样品采集
        2.1.2 主要实验药品
        2.1.3 主要实验仪器
        2.1.4 培养基与溶液的配制
            2.1.4.1 培养基的配制
            2.1.4.2 溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 产α-半乳糖苷酶菌种的分离和纯化
        2.2.2 菌株的鉴定
            2.2.2.1 菌株16S rDNA鉴定
            2.2.2.2 菌株形态学和生理生化特征
    2.3 结果与分析
        2.3.1 菌株16S rDNA鉴定
        2.3.2 菌株形态学和生理生化特征
    2.4 结论和讨论
第三章 菌株生长及产酶条件的优化
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌种
        3.1.2 主要实验药品
        3.1.3 主要实验仪器
        3.1.4 培养基及试剂配方
    3.2 α-半乳糖苷酶活测定方法
        3.2.1 粗酶液的制备
        3.2.2 酶活的测定
        3.2.3 标准曲线的绘制
        3.2.4 胞内酶和胞外酶的判断
    3.3 菌株GK的生长和产酶条件优化
        3.3.1 温度对菌株生长及产酶的影响
        3.3.2 培养基初始pH对菌株生长及产酶的影响
        3.3.3 菌株生长及产酶随时间的变化
        3.3.4 碳源对菌株生长及产酶的影响
        3.3.5 氮源对菌株生长及产酶的影响
        3.3.6 不同金属离子及螯合剂对菌株生长的影响
        3.3.7 不同接种量对菌株生长及产酶的影响
        3.3.8 摇瓶装液量对菌株生长及产酶的影响
        3.3.9正交实验
    3.4 结果与分析
        3.4.1 温度对菌株生长及产酶的影响
        3.4.2 初始pH对菌株生长及产酶的影响
        3.4.3 菌株生长及产酶随时间的变化
        3.4.4 碳源对菌株生长及产酶的影响
        3.4.5 氮源对菌株生长及产酶的影响
        3.4.6 不同金属离子及螯合剂对菌株生长的影响
        3.4.7 不同接种量对菌株生长及产酶的影响
        3.4.8 不同摇瓶装液量对菌株生长及产酶的影响
        3.4.9 正交优化实验
    3.5 结论与讨论
第四章 成团泛菌α-半乳糖苷酶酶学性质研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 菌种
        4.1.2 主要实验药品
        4.1.3 主要实验仪器
        4.1.4 溶液的配制
    4.2 试验方法
        4.2.1 粗酶液的制备
        4.2.2 硫酸铵分级沉淀
        4.2.3 透析
    4.3 α-半乳糖苷酶酶学性质研究
        4.3.1 最适温度及温度稳定性
        4.3.2 最适pH及pH稳定性
        4.3.3 不同金属离子对酶活性的影响
    4.4 结果与分析
        4.4.1 硫酸铵分级沉淀
        4.4.2 透析
        4.4.3 温度对酶活的影响
        4.4.4 温度稳定性
        4.4.5 最适pH
        4.4.6 pH稳定性
        4.4.7 金属离子及络合物对α-半乳糖苷酶的影响
    4.5 结论与讨论
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]耐热α-半乳糖苷酶的高效表达及酶学性质初探[J]. 蒋晓芳,周波,杨江科.  生物技术. 2019(02)
[2]金属离子对微生物蛋白酶活性的影响及机理[J]. 余茜,张国丽,敖晓琳.  中国食品学报. 2019(04)
[3]浅谈肥胖病当从脾土论治[J]. 马书玖.  内蒙古中医药. 2018(11)
[4]GTKO猪α-1,3-半乳糖苷转移酶检测方法的进展[J]. 杨佩军,李霄,窦科峰.  实用器官移植电子杂志. 2018(05)
[5]α-半乳糖苷酶的固定化及其对豆浆中低聚糖的水解[J]. 李俊众,刘晓兰,波丽特.  食品科技. 2018(08)
[6]日粮添加α-半乳糖苷酶对断奶仔猪生长性能、养分消化率、肠道形态和消化酶活力的影响[J]. 马红艳,姚毅,赵辉.  中国饲料. 2018(14)
[7]α-半乳糖苷酶的研究进展[J]. 邓春,易弋,李平,伍时华,黎娅.  食品工业. 2016(02)
[8]α-半乳糖苷酶在禽料生产中的应用进展[J]. 罗媛,李孟伟,陈清华.  湖南饲料. 2015(04)
[9]产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、酶学特性和固定化研究[J]. 赵晴潇,魏群.  东北电力大学学报. 2015(03)
[10]EDTA系列螯合剂的应用及合成工艺进展[J]. 李红路,甄壮伟,马建兵,张辰亮,彭艳丽,张东卫,卢冬梅.  精细与专用化学品. 2013(08)

博士论文
[1]榆黄蘑、红平菇和双孢菇子实体中α-半乳糖苷酶理化性质的研究[D]. 胡玉净.中国农业大学 2016
[2]产α-半乳糖苷酶唾液乳杆菌XH4B筛选、性质、应用及高密度培养研究[D]. 杜新永.浙江大学 2014
[3]微生物来源36家族α-半乳糖苷酶的基因克隆与性质研究[D]. 曹雅男.中国农业科学院 2008

硕士论文
[1]α-半乳糖苷酶高产菌株的筛选及其基因的克隆、表达、纯化和性质研究[D]. 贲培培.南京农业大学 2011
[2]不同类型日粮中添加a-半乳糖苷酶对肉仔鸡作用效果的研究[D]. 张继东.河南农业大学 2007



本文编号：3175123