1种简单快速高效的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法

发布时间：2021-05-09 23:33

　　基于Golden20Gate载体构建过程,对CRISPR/Cas9双靶点敲除技术的载体构建系统进行了优化,建立了一种简单快速高效且无PCR扩增的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法。在本方法中,只需将设计好的2个靶点DNA小片段和1个外源片段用T4DNA连接酶构建到CRISPR/Cas9载体上即可。用本方法对10个已报道的水稻基因构建了20个双靶点CRISPR/Cas9载体,阳性率为100%,测序结果显示无突变。该载体系统非常适合大批量CRISPR/Cas9载体的构建,同时也为其他植物中构建双靶点CRISPR/Cas9载体提供借鉴。 

【文章来源】：华中农业大学学报. 2020,39(03)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 双靶点CRISPR/Cas9相关载体的构建
    1.3 双靶点CRISPR/Cas9载体构建
    1.4 引物
2 结果与分析
    2.1 双靶点CRISPR/Cas9相关载体的构建
    2.2 双靶点CRISPR/Cas9载体构建流程
    2.3 高效连接体系的建立
    2.4 本研究构建的载体系统的适用性检测
    2.5 单靶点载体的适用性检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]百脉根LjSERKs基因家族在根瘤共生中的功能鉴定[J]. 汪涛,冯勇,张忠明.  华中农业大学学报. 2018(02)
[2]CRISPR/Cas9在豆科植物毛根转化中的应用及共生基因的编辑[J]. 谭茜,王龙祥,张先鹏,余海翔,张忠明.  华中农业大学学报. 2017(05)



本文编号：3178232