新型异源表达细菌素BM1029的抑菌作用及其机制研究

发布时间：2021-05-16 23:36

　　细菌素可作为食品添加剂用于控制食源性致病菌、延长货架期、替代抗生素等,具有广阔的应用前景。在之前的研究中,通过结合面包乳杆菌MN047的全基因组序列和多肽信息学分析的方法,鉴定得到一种新的II类细菌素（细菌素BM1029）基因,并在大肠杆菌表达系统中成功表达。基于此,本研究以新型异源表达细菌素BM1029为研究对象,探究了BM1029对大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923的抑菌作用及机制。主要研究内容与结果如下:（1）对得到的工程菌株使用IPTG进行诱导,反复冻融裂解细胞,离心后得到的上清作为细菌素粗品。通过透析、超滤等方式除去盐离子及杂质蛋白,之后使用离子交换色谱和高效液相色谱等方式进一步分离纯化,通过LC-MS/MS鉴定纯化后的样品。获得14个片段,覆盖率为88.52%,表明纯化得到的蛋白为目标细菌素。结构和性质预测表明细菌素BM1029具有α-螺旋结构,较高的稳定性,功能注释为可能的DNA结合蛋白。（2）通过琼脂扩散法测定了细菌素BM1029的抑菌谱及稳定性,结果表明BM1029对测试的革兰氏阳性和革兰氏阴性食源性致病菌均显示出较强的抑菌活性,对测试菌株的... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 研究背景
        1.1.1 食品安全现状
        1.1.2 耐药性细菌
        1.1.3 天然防腐剂
    1.2 细菌素概述
        1.2.1 细菌素的性质
        1.2.2 乳酸菌细菌素的分类
        1.2.3 细菌素的异源表达
        1.2.4 细菌素的纯化
        1.2.5 细菌素的应用
    1.3 细菌素的作用机制
        1.3.1 抑制细胞壁合成
        1.3.2 破坏细菌膜完整性
        1.3.3 干扰细胞内生物大分子
    1.4 研究意义及内容
        1.4.1 研究目的与意义
        1.4.2 研究内容
        1.4.3 技术路线
第二章 细菌素BM1029的纯化鉴定
    2.1 试验材料
        2.1.1 主要仪器及设备
        2.1.2 主要试剂与培养基
        2.1.3 主要溶液的配置
        2.1.4 供试菌株
    2.2 试验方法
        2.2.1 细菌素BM1029的分离纯化
        2.2.2 细菌素BM1029的鉴定
        2.2.3 最小抑菌浓度的测定
        2.2.4 细菌素BM1029的理化性质预测
    2.3 结果与分析
        2.3.1 细菌素BM1029的分离纯化
        2.3.2 细菌素BM1029的鉴定
        2.3.3 细菌素BM1029的最小抑菌浓度
        2.3.4 细菌素BM1029的理化性质预测
    2.4 小结
第三章 细菌素BM1029的理化性质
    3.1 试验材料
        3.1.1 主要仪器及设备
        3.1.2 主要试剂与耗材
        3.1.3 供试菌株
    3.2 试验方法
        3.2.1 细菌素BM1029的抑菌谱
        3.2.2 细菌素BM1029的稳定性
        3.2.3 细菌素BM1029的体外溶血活性
        3.2.4 细菌素BM1029的抑菌活性
    3.3 结果与分析
        3.3.1 细菌素BM1029的抑菌谱
        3.3.2 细菌素BM1029的稳定性
        3.3.3 细菌素BM1029的体外溶血活性
        3.3.4 细菌素BM1029的抑菌活性
    3.4 小结
第四章 细菌素BM1029的抑菌机制
    4.1 试验材料
        4.1.1 主要仪器及设备
        4.1.2 主要试剂与耗材
        4.1.3 供试菌株
    4.2 试验方法
        4.2.1 细菌素BM1029对细菌细胞形态学的影响
        4.2.2 细菌素BM1029对细菌细胞膜完整性的影响
        4.2.3 细菌素BM1029对细菌DNA的影响
        4.2.4 细菌素BM1029对细胞周期的影响
    4.3 结果与分析
        4.3.1 细菌素BM1029对细菌细胞表面特性的影响
        4.3.2 细菌素BM1029对细菌细胞膜完整性的影响
        4.3.3 细菌素BM1029对细菌DNA的影响
        4.3.4 细菌素BM1029对细胞周期的影响
    4.4 小结
第五章 细菌素BM1029对食品中微生物的影响
    5.1 试验材料
        5.1.1 主要仪器及设备
        5.1.2 主要食物与培养基
        5.1.3 供试菌株
    5.2 试验方法
        5.2.1 细菌素BM1029对牛奶中细菌生长的影响
        5.2.2 细菌素BM1029对牛肉中细菌生长的影响
    5.3 结果与分析
        5.3.1 细菌素BM1029对牛奶中细菌生长的影响
        5.3.2 细菌素BM1029对牛肉中细菌生长的影响
    5.4 小结
第六章 结论
    6.1 结论
    6.2 创新点
    6.3 展望
参考文献
附录
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]乳酸菌细菌素的作用机制及在肉制品中的应用[J]. 张晓宁,尚一娜,陈境,霍麒文,李明慧,杨姝玉,邢叶妮,王俊国.  食品研究与开发. 2018(11)
[2]细菌素在乳制品生产及贮藏保鲜中的应用[J]. 师坤,李军,杨胖.  中国奶牛. 2018(01)
[3]乳酸菌抗菌肽(细菌素)抗菌机理的研究进展[J]. 任璐雅,杨艳艳,章检明,易华西,张兰威.  中国食品添加剂. 2015(01)
[4]食品中大肠杆菌生物检测方法的研究进展[J]. 郝江燕,胡文忠,冯叙桥,何煜波,吕晓萌.  食品工业科技. 2013(15)
[5]细菌素应用研究进展[J]. 孙红姣,许军勇.  科技信息. 2009(36)



本文编号：3190625