定点突变提高过氧化氢酶热稳定性和催化效率

发布时间：2021-05-17 11:55

　　过氧化氢酶催化过氧化氢分解形成水和氧,主要作用是保护细胞免受活性氧（ROS）的损伤,尽管其在工业上被广泛使用,但因热稳定的不足限制了它的使用前景。本研究以Bacillus pumilus ML413来源的血红素过氧化氢酶（Kat X2）为研究对象,采用定点突变技术提高其热稳定性及催化效率。利用Po PMu Si C algorithm软件计算并预测了其潜在突变位点的折叠自由能,根据预测的结果,选择了其中自由能最低的3个位点（K117V, K117I和K117M）进行突变。结果发现,对K117位点进行突变,可以有效提高Kat X2的热稳定性,突变体K117V在60℃下半衰期比野生型Kat X2提高38 min,催化效率较突变前提高31.7%。根据结构分析发现,该点突变并未改变Kat X2的二级结构。突变体K117V具有良好的工业应用潜力。 

【文章来源】：食品与生物技术学报. 2020,39(03)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株，质粒和材料
    1.2 定点突变及重组菌株的构建
    1.3 培养条件
    1.4 过氧化氢酶的纯化
    1.5 酶活测定
    1.6 过氧化氢酶酶学特性分析
        1.6.1 过氧化氢酶动力学参数
        1.6.2 p H及温度对酶的影响
        1.6.3 金属离子的影响
    1.7 结构建模
2 结果与讨论
    2.1 突变位点的选择
    2.2 过氧化氢酶的过表达和纯化
    2.3 过氧化氢酶突变体酶学特性分析
    2.4 温度、pH和金属离子对突变体的影响
3 结语


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于关键因素调控发酵生产过氧化氢酶[J]. 周丽萍,刘龙,李江华,堵国成,陈坚.  食品与生物技术学报. 2013(11)
[2]耐热过氧化氢酶基因工程菌的构建及其发酵条件[J]. 段绪果,沈微,李艳丽,饶志明,唐雪明,方慧英,刘吉泉,诸葛健.  食品与生物技术学报. 2006(02)



本文编号：3191719