寡核苷酸重组工程和CRISPR-Cas9联合介导的恶臭假单胞菌KT2440基因组编辑

发布时间：2021-05-20 04:42

　　重组工程也叫?-Red/ET同源重组技术,它是一种基于?噬菌体来源的重组酶催化DNA之间的同源重组而实现基因克隆与修饰的的一种基因工程操作手段。该技术实验过程操作简单,不需要克隆操作,不受到制性内切酶酶切位点以及DNA分子大小的限制,可以实现对基因组精确修饰的目的。而单链寡核苷酸重组工程技术可以在基因组上实现多个位点的同步编辑,相比于传统的重组工程更加简便和快捷。CRISPR-Cas系统（成簇规律间隔的短回文重复序列和CRISPR相关蛋白）属于细菌与古细菌在长期进化演变过程中形成的一种可以针对噬菌体的感染、质粒接合以及转化等基因导入而形成特异性的防御机制。目前,II型CRISPR-Cas9系统是研究的主要焦点,也是最广泛使用的基因编辑系统。该技术在基因组改造方面具有很高的编辑效率以及可编程性,现在已经成为一种在实验室中被广泛使用的基因编辑工具。恶臭假单胞菌KT2440（Pseudomonas putida KT2440）是一种最具特征性的革兰氏阴性假单胞菌,已经越来越成为有价值的化合物异源表达宿主菌。而且恶臭假单胞菌KT2440具有净化环境的作用,可以降解环境中的一些有机物,在生物技术... 

【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 综述
    1 恶臭假单胞菌KT2440
        1.1 恶臭假单胞菌KT2440 概述
        1.2 恶臭假单胞菌KT2440 的研究进展
    2 重组
        2.1 DNA重组
        2.2 同源重组
    3 重组工程
        3.1 重组工程概述
        3.2 重组工程的作用机理
        3.3 重组工程的研究进展
        3.4 I-SceI
    4 CRISPR-Cas系统
        4.1 CRISPR-Cas系统概述
        4.2 CRISPR-Cas系统的分类与结构
        4.3 CRISPR-Cas9 基因编辑系统
        4.4 CRISPR-Cas9 基因编辑系统的作用机制
        4.5 CRISPR-dCas9 调控系统
        4.6 CRISPR-Cas9 基因编辑假单胞菌研究进展
第二章 基于kan修复原理对P.putidaKT2440 寡核苷酸重组效率的优化与探索
    第一节 筛选应用于P.putida KT2440 寡核苷酸重组工程的重组酶基因
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 实验结果
    第二节 优化P.putida KT2440 寡核苷酸重组效率
        1 实验方法
        2 实验结果
        3 分析与讨论
第三章 寡核苷酸重组工程和CRISPR-Cas9 技术联合介导的P.putida KT2440 基因组编辑
    第一节 比较应用于P.putida KT2440 基因编辑的mkan sgRNA表达启动子的活性
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 实验结果
    第二节 寡核苷酸重组工程和CRISPR-Cas9 联合介导的P.putidaKT2440 染色体基因的点突变与敲除
        1 质粒构建
        2 实验结果
        3 分析与讨论
第四章 对P.putida KT2440 CRISPR-dCas9 系统的探索
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 实验结果
    4 分析与讨论
总结
参考文献
致谢
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本文编号：3197113