RY元件在AtBGLU19启动子中的作用分析
发布时间：2021-05-20 21:11
随着分子生物学在基因工程中的发展利用,基因工程已经成为获得转基因植株的一项重要工具,它对当代农业的发展意义深远。在转基因技术中,应当阐明外源基因的功能和相关调控机制,以及它们在植物中的表达位点和表达水平。另外由于外源基因在植物中的表达需要通过结合转录因子进行调节,因此鉴定外源基因的启动子及启动子上调控元件的功能是至关重要的。本实验室已有研究表明拟南芥β-葡萄糖苷酶19（Beta-glucosidase,BGLU19）基因启动子能够驱动外源基因在种子部位特异性表达,证明它是一个种子特异性启动子。与此同时对At BGLU19启动子的全长序列进行分析,鉴定出很多与其表达相关的顺式作用元件。在这些参与种子特异性表达的顺式作用元件中,RY元件与种子特异性表达密切相关。绿色荧光蛋白（GFP）是一类生物发光蛋白,它可以代替GUS基因作为转基因植物的一种分子标记。因此在本次研究中,使用GFP基因作为报告基因,设计了At BGLU19启动子序列上三个RY元件的突变序列,然后通过突变引物的PCR扩增得到了RY元件突变的启动子片段,继而连接到植物表达载体上。利用农杆菌介导的浸花法将上述表达载体转化至拟南芥中...
【文章来源】：曲阜师范大学山东省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词
第一章 文献综述
1.1 β-葡萄糖苷酶(BGLU)研究进展
1.1.1 简介
1.1.2 β-葡萄糖苷酶的结构及功能研究
1.1.3 β-葡萄糖苷酶的应用
1.2 植物组织特异型启动子
1.2.1 组织特异型启动子
1.2.2 种子特异性启动子相关调控元件
1.2.3 启动子的研究方法
1.3 本研究的目的及意义
1.4 本研究的技术路线
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 植物培养材料
2.1.3 菌株和载体
2.1.4 生化试剂、酶以及试剂盒
2.1.5 实验仪器
2.1.6 常用溶液、培养基的配制方法
2.2 实验方法
2.2.1 拟南芥At BGLU19 RY元件突变启动子PCR扩增
2.2.2 拟南芥At BGLU19 启动子突变片段表达载体的构建
2.2.3 表达载体转化农杆菌
2.2.4 浸花法侵染拟南芥
2.2.5 转基因植株的种植
2.2.6 转基因植株的筛选
2.2.7 转基因纯系拟南芥检测GFP荧光步骤
2.2.8 半定量RT-PCR检测GFP表达量
第三章 结果与分析
3.1 At BGLU19 启动子各突变RY元件位点
3.2 At BGLU19 RY元件突变启动子植物表达载体的构建
3.2.1 At BGLU19 RY元件突变启动子的PCR扩增
3.2.2 表达载体的酶切鉴定
3.3 转基因拟南芥纯系的获得
3.4 GFP荧光检测分析
3.4.1 野生型与RY元件突变启动子在种子阶段的GFP荧光观察
3.5 半定量RT-PCR检测GFP表达量
第四章 结论与讨论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]棉花种子特异性启动子的克隆及序列分析[J]. 周佳佳,孙觅真,张素青,伊海法,邢会贤,王丽媛,宋宪亮,孙学振. 山东农业科学. 2014(06)
[2]β-葡萄糖苷酶I、L-6和IL-12在诊断新生儿坏死性小肠结肠炎中的应用价值[J]. 李晓霞. 中国现代医生. 2012(23)
[3]β-葡萄糖苷酶研究进展[J]. 杨晓宽. 河北科技师范学院学报. 2012(01)
[4]拟南芥根特异表达基因启动子在烟草中的表达[J]. 吕山花,孙宽莹,樊颖伦. 西北植物学报. 2011(06)
[5]种子特异性启动子的研究进展[J]. 李吉涛,郭建春. 安徽农业科学. 2008(04)
[6]种子特异性启动子研究进展[J]. 刘晓娜,付畅,黄永芬. 植物学通报. 2007(02)
[7]β-葡萄糖苷酶对豆奶及豆奶粉中大豆异黄酮糖苷化合物的转化作用研究[J]. 徐茂军. 中国食品学报. 2005(04)
[8]β-葡萄糖苷酶在工农医领域的应用[J]. 邵金辉,韩金祥,朱有名,吴围屏,吴坚美. 生命的化学. 2005(01)
博士论文
[1]玉米胚特异性高表达启动子的基因组规模筛选、克隆和功能鉴定[D]. 柳小庆.中国农业科学院 2014
硕士论文
[1]麦谷蛋白基因及甲硫氨酸亚砜还原酶基因启动子功能分析[D]. 欧文韬.山东大学 2015
本文编号：3198437
【文章来源】：曲阜师范大学山东省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词
第一章 文献综述
1.1 β-葡萄糖苷酶(BGLU)研究进展
1.1.1 简介
1.1.2 β-葡萄糖苷酶的结构及功能研究
1.1.3 β-葡萄糖苷酶的应用
1.2 植物组织特异型启动子
1.2.1 组织特异型启动子
1.2.2 种子特异性启动子相关调控元件
1.2.3 启动子的研究方法
1.3 本研究的目的及意义
1.4 本研究的技术路线
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 植物培养材料
2.1.3 菌株和载体
2.1.4 生化试剂、酶以及试剂盒
2.1.5 实验仪器
2.1.6 常用溶液、培养基的配制方法
2.2 实验方法
2.2.1 拟南芥At BGLU19 RY元件突变启动子PCR扩增
2.2.2 拟南芥At BGLU19 启动子突变片段表达载体的构建
2.2.3 表达载体转化农杆菌
2.2.4 浸花法侵染拟南芥
2.2.5 转基因植株的种植
2.2.6 转基因植株的筛选
2.2.7 转基因纯系拟南芥检测GFP荧光步骤
2.2.8 半定量RT-PCR检测GFP表达量
第三章 结果与分析
3.1 At BGLU19 启动子各突变RY元件位点
3.2 At BGLU19 RY元件突变启动子植物表达载体的构建
3.2.1 At BGLU19 RY元件突变启动子的PCR扩增
3.2.2 表达载体的酶切鉴定
3.3 转基因拟南芥纯系的获得
3.4 GFP荧光检测分析
3.4.1 野生型与RY元件突变启动子在种子阶段的GFP荧光观察
3.5 半定量RT-PCR检测GFP表达量
第四章 结论与讨论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]棉花种子特异性启动子的克隆及序列分析[J]. 周佳佳,孙觅真,张素青,伊海法,邢会贤,王丽媛,宋宪亮,孙学振. 山东农业科学. 2014(06)
[2]β-葡萄糖苷酶I、L-6和IL-12在诊断新生儿坏死性小肠结肠炎中的应用价值[J]. 李晓霞. 中国现代医生. 2012(23)
[3]β-葡萄糖苷酶研究进展[J]. 杨晓宽. 河北科技师范学院学报. 2012(01)
[4]拟南芥根特异表达基因启动子在烟草中的表达[J]. 吕山花,孙宽莹,樊颖伦. 西北植物学报. 2011(06)
[5]种子特异性启动子的研究进展[J]. 李吉涛,郭建春. 安徽农业科学. 2008(04)
[6]种子特异性启动子研究进展[J]. 刘晓娜,付畅,黄永芬. 植物学通报. 2007(02)
[7]β-葡萄糖苷酶对豆奶及豆奶粉中大豆异黄酮糖苷化合物的转化作用研究[J]. 徐茂军. 中国食品学报. 2005(04)
[8]β-葡萄糖苷酶在工农医领域的应用[J]. 邵金辉,韩金祥,朱有名,吴围屏,吴坚美. 生命的化学. 2005(01)
博士论文
[1]玉米胚特异性高表达启动子的基因组规模筛选、克隆和功能鉴定[D]. 柳小庆.中国农业科学院 2014
硕士论文
[1]麦谷蛋白基因及甲硫氨酸亚砜还原酶基因启动子功能分析[D]. 欧文韬.山东大学 2015
本文编号：3198437
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3198437.html
教材专著
