电穿孔法转染人乳腺癌细胞MCF-7的条件优化研究
发布时间：2021-06-26 08:02
通过控制电穿孔时的电压、电脉冲时长、电脉冲次数、质粒浓度和细胞状态等转染条件,将pcDNA3.1（+）-EGFP质粒转入MCF-7细胞,于倒置荧光显微镜下观察EGFP表达情况以检测转染效率,探讨不同电穿孔条件对人乳腺癌MCF-7细胞转染效率的影响,确定MCF-7细胞的最佳电转染条件。结果表明:人乳腺癌细胞MCF-7在电压150 V、质粒浓度1μg/μL左右、脉冲数2次、脉冲时长5 ms、传代时间24 h时可达到较高的电转染率。
【文章来源】：生物化工. 2020,6(01)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
不同电压条件对人乳腺癌细胞MCF-7电转染效率的影响
当电脉冲次数为2次，电脉冲时长为5 ms，电压值为150 V，按照表2中的质粒浓度进行电转染实验。由单因素方差分析可知，质粒浓度为1.176μg/μL条件下获得最大转染效率为66.20%±2.48%；从图2中可观察出随着质粒浓度的不断提高（0.377～0.985μg/μL），转染效率相应提高，但当质粒浓度为1μg/μL左右（0.985～1.176μg/μL）时，由独立样本t检验分析可知，质粒浓度的变化对细胞转染效率的影响不显著（P>0.05），提示电转染时质粒浓度存在饱和性问题，1μg/μL很可能是其阈浓度。2.3 电脉冲次数对转染效率的影响
当电脉冲时长为5 ms，质粒浓度为1.176μg/μL，电压值为150 V，按照表3中的电脉冲次数进行电转实验。由单因素方差分析可知，脉冲次数为2次时获得最大转染效率66.20%±2.48%；由图3和独立样本t检验分析结果可知，脉冲次数为2时与1次及3次时的转染效率差异均有显著性意义（P<0.05）。2.4 电脉冲时长对转染效率的影响
本文编号：3250961
【文章来源】：生物化工. 2020,6(01)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
不同电压条件对人乳腺癌细胞MCF-7电转染效率的影响
当电脉冲次数为2次，电脉冲时长为5 ms，电压值为150 V，按照表2中的质粒浓度进行电转染实验。由单因素方差分析可知，质粒浓度为1.176μg/μL条件下获得最大转染效率为66.20%±2.48%；从图2中可观察出随着质粒浓度的不断提高（0.377～0.985μg/μL），转染效率相应提高，但当质粒浓度为1μg/μL左右（0.985～1.176μg/μL）时，由独立样本t检验分析可知，质粒浓度的变化对细胞转染效率的影响不显著（P>0.05），提示电转染时质粒浓度存在饱和性问题，1μg/μL很可能是其阈浓度。2.3 电脉冲次数对转染效率的影响
当电脉冲时长为5 ms，质粒浓度为1.176μg/μL，电压值为150 V，按照表3中的电脉冲次数进行电转实验。由单因素方差分析可知，脉冲次数为2次时获得最大转染效率66.20%±2.48%；由图3和独立样本t检验分析结果可知，脉冲次数为2时与1次及3次时的转染效率差异均有显著性意义（P<0.05）。2.4 电脉冲时长对转染效率的影响
本文编号：3250961
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