拟南芥T-DNA插入株系SALK＿037453叶发育突变位点的鉴定和分析

发布时间：2021-07-07 13:28

　　对来自Salk库的拟南芥T-DNA插入突变体SALK₀37453的表型分析发现,该突变体株系因莲座叶叶柄较短而呈现聚集表型。遗传分析和PCR检测显示,SALK₀37453突变体的表型与网站提供的T-DNA插入位点所在基因不连锁,应是由另外的未知插入位点的T-DNA引起的。为了寻找该位点,鉴定导致莲座叶聚集表型的基因,本研究利用TAIL-PCR的方法,鉴定出与突变表型连锁的T-DNA插入位点,位于基因At4G39400（AtBRI1）和At4G39403（AtPLS）之间。进一步利用qRT-PCR的方法检测,发现该位点由于T-DNA的插入,同时影响了AtBRI1和AtPLS的转录水平的表达。该研究为探索叶发育的过程提供了新的候选基因,并为进一步阐明AtBRI1和AtPLS的生物学功能提供了新材料。 

【文章来源】：河北农业大学学报. 2020,43(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

SALK＿037453(atplc3-1）和SALK＿054406(atplc3-2）的T-DNA插入位点（A）及AtPLC3基因的表达（B)

图1 SALK＿037453(atplc3-1）和SALK＿054406(atplc3-2）的T-DNA插入位点（A）及AtPLC3基因的表达（B)2.2 利用TAIL-PCR捕获SALK＿037453X中未知T-DNA插入位点X

本试验中以SALK＿037453X拟南芥基因组DNA为模板，利用TAIL-PCR技术以3个T-DNA序列中的特异引物和4个随机兼并引物扩增T-DNA侧翼序列，发现特异引物分别与AD1,AD2,AD3组合条件下可以获得清晰的条带，且比第2轮小300 bp（图3A），符合TAIL-PCR的要求。切下符合要求的3个（图3A中箭头所指）条带并送测序，比对后发现3条带的序列是相同的，进一步在拟南芥基因组中BLAST，获得了T-DNA插入的X位点两侧区域的碱基序列（图3B），该序列位于基因At4G39400(AtBRI1）和At4G39403(AtPLS）之间，属于基因的调控区（图3C）。获得X位点的序列后，进一步通过遗传杂交结合PCR检测的方法获取仅有X位点T-DNA插入的SALK＿037453X的纯合体，即SALK＿037453X中的T-DNA只有1个拷贝，且插入在X位点,并观察表型。结果显示SALK＿037453X纯合体也呈现莲座叶聚集表型（图2A），证实该突变表型仅由T-DNA在X位点的插入造成的。

【参考文献】：
期刊论文
[1]利用TAIL-PCR技术分析拟南芥At1g52910突变体插入位点的侧翼序列[J]. 田蕾,郭妍君,任丽,王钰,孙菲,齐海坤,马楠,戚晓利.  中国野生植物资源. 2016(04)



本文编号：3269716