褶纹冠蚌谷胱甘肽硫转移酶和超氧化物歧化酶基因的表达与功能分析
发布时间：2021-07-13 08:23
谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）是多功能的II期解毒酶,其催化亲电子底物与谷胱甘肽的连接,在保护生物体免受活性氧物质毒性方面起重要作用。本文从褶纹冠蚌Cristaria plicata克隆了一个alpha级GST（CpGST5）cDNA序列。CpGST5 cDNA的全长为1885 bp,开放阅读框为669 bp,编码222个氨基酸。蛋白结构分析表明CpGST5的成熟肽包括2个典型结构域,保守域GSTN和保守结构域GSTC,N末端含有GSH结合位点（G位点）。C末端中含有底物结合口袋（H位点）的位点。实时定量PCR结果显示在各组织中CpMnSOD mRNA组成型表达。CpGST5基因在肝胰腺中表达量最高,外套膜中表达量最低。在微囊藻毒素刺激后,肝胰腺和血淋巴中CpGST5的表达水平显示出显著增加的趋势。重组CpGST5在大肠杆菌中表达为包涵体形式。锰超氧化物歧化酶（Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD）是一种重要的金属酶,催化ROS在生物体内形成无害的分子氧和过氧化氢。本文通过cDNA末端PCR的快速扩增,使...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
总RNA检测
图 2.1 总 RNA 检测Fig. 2.1 Electrophoresis detection of total RNA2.7.2 褶纹冠蚌 GST5 基因的克隆根据构建的褶纹冠蚌血细胞转录组文库筛选出了 CpMnSOD 和 CpGST5 基因片段，分别设计引物 CpMnSOD-F1, CpMnSOD-R1 和 CpGST5-F1, CpGST5-R1扩增其中间片段，然后分别设计特异引物扩增获得 3’末端和 5’末端序列。（A） (B) (C)
第二章 褶纹冠蚌 GST 和 MnSOD 基因的表达与功能分析注:起始密码子和终止密码子用下划线标示，保守域 GST_N 以灰色阴影显示。 预测的保守结构域 GST_C 以绿色阴影显示。N_terminal 中的 GSH 结合位点（G 位点）加下划线。C_terminal 中底物结合口袋（H 位点）的位点用红色阴影显示。Fig. 2.3 Information of Cp GST5 sequences Note: The start codon and the stop codon were underlined, The conserved domains GST_Nis shaded in gray. The predicted conserved domains GST_C is shaded in green. GSH-binding sites(G-site) in N_terminal is underlined. Sites of substrate binding pocket (H-site) in C_terminal isshaded in red.2.7.4 CpGST5 氨基酸推导序列的同源性比对将褶纹冠蚌 CpGST5 推导氨基酸序列与 13 种物种的 GST5 的氨基酸序列进行同源多序列比对，结果显示，这些物种之间存在相似性。褶纹冠蚌 GST5 氨基酸序列与紫贻贝（Mytilus galloprovincialis）的同源性最高，达到 47.17%(图 2.4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]微囊藻毒素对鸭胚的毒性及半致死剂量研究[J]. 张晓波,李晓青,李璟,程培,袁琪,张易祥. 安徽农业科学. 2011(19)
[2]超氧化物歧化酶的生理活性[J]. 朱秀敏. 当代医学. 2011(15)
[3]荨麻疹患者血清中SOD、MDA的检测及其意义[J]. 赵旭传,郜玉玲,尉莉. 中国麻风皮肤病杂志. 2008(01)
[4]超氧化物歧化酶（SOD）的研究和应用进展[J]. 林庆斌,廖升荣,熊亚红,乐学义. 化学世界. 2006(06)
[5]微囊藻毒素对水生生物的生态毒理学研究进展[J]. 胡智泉,李敦海,刘永定,何光源. 自然科学进展. 2006(01)
[6]超氧化物歧化酶的现状研究进展[J]. 田春美,钟秋平. 中国热带医学. 2005(08)
[7]微囊藻毒素对褶皱臂尾轮虫的毒性效应和种群增长影响[J]. 陈艳,王金秋,王阳,俞顺章. 中国环境科学. 2002(03)
[8]超氧化物歧化酶在食品和化妆品中的应用及其发酵法生产进展[J]. 崔慧斐,张天民. 药物生物技术. 2000(03)
[9]超氧物歧化酶的研究进展和应用前景[J]. 张博润,谭华荣. 微生物学通报. 1992(06)
博士论文
[1]三角帆蚌肽聚糖识别蛋白和谷胱甘肽硫转移酶的基因克隆和功能分析[D]. 杨子彦.华中科技大学 2013
硕士论文
[1]褶纹冠蚌GST基因克隆与表达分析[D]. 察玉端.南昌大学 2016
[2]松江鲈（Trachidermus fasciatus）谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆、表达与功能分析[D]. 张秋霞.山东大学 2013
[3]近江牡蛎（Crassostrea hongkongensis）谷胱甘肽S转移酶和金属硫蛋白基因cDNA克隆及原核表达研究[D]. 张妍.暨南大学 2012
[4]褶纹冠蚌谷胱甘肽硫转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶基因的分子克隆、表达及功能鉴定[D]. 邓利荣.南昌大学 2011
[5]褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表达及蛋白性质研究[D]. 徐欢欢.南昌大学 2011
本文编号：3281719
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
总RNA检测
图 2.1 总 RNA 检测Fig. 2.1 Electrophoresis detection of total RNA2.7.2 褶纹冠蚌 GST5 基因的克隆根据构建的褶纹冠蚌血细胞转录组文库筛选出了 CpMnSOD 和 CpGST5 基因片段，分别设计引物 CpMnSOD-F1, CpMnSOD-R1 和 CpGST5-F1, CpGST5-R1扩增其中间片段，然后分别设计特异引物扩增获得 3’末端和 5’末端序列。（A） (B) (C)
第二章 褶纹冠蚌 GST 和 MnSOD 基因的表达与功能分析注:起始密码子和终止密码子用下划线标示，保守域 GST_N 以灰色阴影显示。 预测的保守结构域 GST_C 以绿色阴影显示。N_terminal 中的 GSH 结合位点（G 位点）加下划线。C_terminal 中底物结合口袋（H 位点）的位点用红色阴影显示。Fig. 2.3 Information of Cp GST5 sequences Note: The start codon and the stop codon were underlined, The conserved domains GST_Nis shaded in gray. The predicted conserved domains GST_C is shaded in green. GSH-binding sites(G-site) in N_terminal is underlined. Sites of substrate binding pocket (H-site) in C_terminal isshaded in red.2.7.4 CpGST5 氨基酸推导序列的同源性比对将褶纹冠蚌 CpGST5 推导氨基酸序列与 13 种物种的 GST5 的氨基酸序列进行同源多序列比对，结果显示，这些物种之间存在相似性。褶纹冠蚌 GST5 氨基酸序列与紫贻贝（Mytilus galloprovincialis）的同源性最高，达到 47.17%(图 2.4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]微囊藻毒素对鸭胚的毒性及半致死剂量研究[J]. 张晓波,李晓青,李璟,程培,袁琪,张易祥. 安徽农业科学. 2011(19)
[2]超氧化物歧化酶的生理活性[J]. 朱秀敏. 当代医学. 2011(15)
[3]荨麻疹患者血清中SOD、MDA的检测及其意义[J]. 赵旭传,郜玉玲,尉莉. 中国麻风皮肤病杂志. 2008(01)
[4]超氧化物歧化酶（SOD）的研究和应用进展[J]. 林庆斌,廖升荣,熊亚红,乐学义. 化学世界. 2006(06)
[5]微囊藻毒素对水生生物的生态毒理学研究进展[J]. 胡智泉,李敦海,刘永定,何光源. 自然科学进展. 2006(01)
[6]超氧化物歧化酶的现状研究进展[J]. 田春美,钟秋平. 中国热带医学. 2005(08)
[7]微囊藻毒素对褶皱臂尾轮虫的毒性效应和种群增长影响[J]. 陈艳,王金秋,王阳,俞顺章. 中国环境科学. 2002(03)
[8]超氧化物歧化酶在食品和化妆品中的应用及其发酵法生产进展[J]. 崔慧斐,张天民. 药物生物技术. 2000(03)
[9]超氧物歧化酶的研究进展和应用前景[J]. 张博润,谭华荣. 微生物学通报. 1992(06)
博士论文
[1]三角帆蚌肽聚糖识别蛋白和谷胱甘肽硫转移酶的基因克隆和功能分析[D]. 杨子彦.华中科技大学 2013
硕士论文
[1]褶纹冠蚌GST基因克隆与表达分析[D]. 察玉端.南昌大学 2016
[2]松江鲈（Trachidermus fasciatus）谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆、表达与功能分析[D]. 张秋霞.山东大学 2013
[3]近江牡蛎（Crassostrea hongkongensis）谷胱甘肽S转移酶和金属硫蛋白基因cDNA克隆及原核表达研究[D]. 张妍.暨南大学 2012
[4]褶纹冠蚌谷胱甘肽硫转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶基因的分子克隆、表达及功能鉴定[D]. 邓利荣.南昌大学 2011
[5]褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表达及蛋白性质研究[D]. 徐欢欢.南昌大学 2011
本文编号：3281719
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