中华蜜蜂AcerOr1基因昆虫表达载体pIB/V5-His的构建及功能分析

发布时间：2021-07-23 04:49

　　【目的】构建能在Sf9昆虫细胞中稳定高效表达中华蜜蜂气味受体AcerOr1的重组表达载体,并对其功能进行分析。【方法】将目的基因AcerOr1和昆虫表达载体pIB/V5-His载体用Bam HI和EcoRI做双酶切,通过T4DNA连接酶构建成含目的基因AcerOr1的表达载体pIB/V5-AcerOr1。将重组表达载体用脂质体转染的方法转染至Sf9细胞中,利用免疫荧光和Western blot检测AcerOr1蛋白的亚细胞定位和表达情况;利用全波长多功能酶标仪检测该受体对4种花香物质刺激后细胞内Ca²⁺浓度的变化。【结果】成功构建重组表达载体pIB/V5-AcerOr1并建立稳定转染细胞系;Western blot结果证明重组表达载体能在昆虫细胞Sf9中表达;免疫荧光显示重组表达载体在Sf9细胞膜上表达,与预测结果一致。转染pIB/V5-AcerOr1的细胞受花香物质月桂酸（Lauric acid）、亚麻酸（Linolenic acid）、α-松油醇（α-Terpineol）、十一酸（Undecanoic acid）刺激时,均能引起细胞内Ca²⁺

【文章来源】：福建农业学报. 2020,35(04)北大核心CSCD

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本文编号：3298633