重组贝伐珠单抗细胞培养工艺研究

发布时间：2021-08-02 05:37

　　贝伐珠单抗是一种单克隆抗体,在肿瘤和黄斑变性的治疗中发挥着重要作用,具有很高的医学价值和广阔的市场应用前景。本课题组已经构建并筛选出一株稳定表达贝伐珠单抗的重组中国仓鼠卵巢（recombinant Chinese hamster ovary,r CHO）细胞,本文计划对该细胞株进行细胞培养工艺研究,并对该细胞株培养过程存在的问题进行研究和探讨。首先通过单因素实验初步筛选出适合该重组CHO细胞的5个培养参数,包括初始活细胞密度（initial viable cell density,IVCD）、基础培养基、培养温度、变温活细胞密度（shift VCD）和补料培养基,结果显示基础培养基存在乳酸累积现象,因此进一步通过调整补料方式和添加铜离子对乳酸代谢进行调控,最终确定当铜离子添加浓度为120μg/L,补料策略为d3～d14补料量维持第二天残糖水平为2 g/L最有利于细胞生长代谢和抗体产物表达。此外,本文采用实验设计（全因子设计和中心复合设计）和响应面分析的方法,优化了重组贝伐珠单抗的细胞培养工艺,对最佳工艺参数进行验证,得到最佳参数组合:初始活细胞密度0.9±0.1×10⁶

【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校

【文章页数】：125 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
summary
第一章 综述
    1.1 单克隆抗体药物概述
        1.1.1 单克隆抗体药物分类
        1.1.2 单克隆抗体药物的应用和发展现状
        1.1.3 重组贝伐珠单抗
    1.2 单克隆抗体细胞培养
        1.2.1 动物细胞表达系统
        1.2.2 动物细胞培养工艺
        1.2.3 影响单抗细胞培养工艺特性的培养条件
        1.2.4 细胞培养过程对抗体质量的影响
    1.3 本文研究内容、目的及意义
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 培养基及试剂
        2.1.3 实验设备
    2.2 细胞培养方法
        2.2.1 种子复苏和细胞扩增
        2.2.2 分批培养(batch)
        2.2.3 分批补料培养(fed-batch)
    2.3 细胞培养过程参数检测方法
        2.3.1 活细胞密度检测
        2.3.2 培养过程参数检测
    2.4 抗体表达量、抗体电荷异质性及抗体糖型检测方法
        2.4.1 抗体含量测定方法
        2.4.2 抗体电荷异质性检测
        2.4.3 抗体糖型检测
    2.5 抗体表达量及抗体电荷异质性检测方法学验证
        2.5.1 抗体表达量检测方法验证(Titer-HPLC)
        2.5.2 抗体电荷异质性检测方法验证(CEX-HPLC)
        2.5.3 验证结论
第三章 rCHO细胞生长代谢及其培养条件筛选
    3.1 引言
    3.2 实验设计
        3.2.1 基础培养条件筛选单因素实验设计
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 不同的初始活细胞密度对细胞生长的影响
        3.3.2 不同培养温度对细胞生长的影响
        3.3.3 变温活细胞密度对细胞生长的影响
        3.3.4 基础培养基对细胞生长的影响
        3.3.5 补料培养基对细胞生长的影响
    3.4 小结
第四章 补料策略及铜离子对rCHO细胞代谢的影响
    4.1 前言
    4.2 实验设计及结果
        4.2.1 补料策略和铜离子对细胞生长乳酸代谢的影响实验
        4.2.2 DoE实验设计及其验证实验
    4.3 小结
第五章 添加物对细胞抗体质量的影响
    5.1 前言
    5.2 实验设计
    5.3 结果和讨论
        5.3.1 铜离子对两种混合培养基(空白对照组)的细胞生长代谢和抗体浓度、质量的影响
        5.3.2 铜离子和锰离子对细胞抗体浓度和质量的影响
        5.3.3 铜离子和锰离子对细胞抗体浓度和糖型的交互作用
        5.3.4 岩藻糖(Fucose)对细胞生长和抗体浓度、糖型的影响
    5.4 小结
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
主要参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因小鼠技术在全人源抗体药物研发中的应用[J]. 王志明.  中国新药杂志. 2016(22)
[2]金属离子对CHO细胞抗体表达及抗体电荷分布的影响[J]. 张鑫涛,唐红萍,赵亮,范里,刘旭平,缪仕伟,谭文松.  生物技术通报. 2016(08)
[3]抗体药物在抗感染领域的应用[J]. 李新颖,吕明.  药学学报. 2015(12)
[4]单克隆抗体药物在肿瘤治疗中的研究进展[J]. 张敏,李佳,俞德超.  实用肿瘤杂志. 2015(06)
[5]抗肿瘤抗体药物的研究进展[J]. 陈雪静,常亮,高健.  中国生物制品学杂志. 2015(01)
[6]重组CHO细胞培养条件研究[J]. 杨贝贝,徐秀丽.  生物技术世界. 2014(11)
[7]单克隆抗体人源化技术研究进展[J]. 涂少华,陶嵘,沈江帆.  国际放射医学核医学杂志. 2014 (05)
[8]核心岩藻糖基化控制在治疗性抗体研究中的应用[J]. 杨洞庭,宋淑亮,吉爱国.  生命的化学. 2012(02)
[9]单克隆抗体治疗自身免疫性疾病的研究进展[J]. 陈镜宇,魏伟.  中国新药杂志. 2011(08)
[10]常压盐溶液法从烟气脱硫石膏制备硫酸钙晶须研究[J]. 吴晓琴,裘建军.  武汉科技大学学报. 2011(02)

博士论文
[1]VEGF靶向抗体研制及其促肿瘤分子机制探讨[D]. 杨静.中国人民解放军军事医学科学院 2014

硕士论文
[1]单克隆抗体药物及其糖基化修饰的质谱分析方法研究[D]. 丛宇婷.吉林大学 2016
[2]贝伐株单克隆抗体制备工艺及质量研究[D]. 刘明力.吉林大学 2015
[3]铜离子对CHO细胞乳酸代谢影响[D]. 胡善心（HO THIEN TAM）.华东理工大学 2015
[4]N-糖基化修饰对人源化IgG抗体药物生产细胞株筛选的重要性[D]. 徐云霞.南京大学 2013
[5]重组CHO细胞的无血清悬浮培养[D]. 张大鹤.华东理工大学 2011



本文编号：3316998