禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的克隆和表达
发布时间：2021-08-03 10:24
本研究参照GenBank中编码禽源热休克蛋白HSP70、HSP40和核糖体蛋白RL4等的基因序列,分别设计特异性引物,采用RT-PCR扩增HSP70、HSP40和RPL4基因,经双酶切后克隆到真核表达载体pEF1α-Myc,得到重组质粒pEF1α-Myc-HSP70、pEF1α-Myc-HSP40和pEF1α-Myc-RPL4;将构建好的重组质粒,转染HEK293T细胞后,采用间接免疫荧光和Western-blot技术,对目的蛋白进行验证。结果表明,Myc-HSP70、Myc-HSP40和Myc-RPL4融合蛋白在HEK293T细胞内得到了正确表达。本研究为后续禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的功能研究奠定了基础。
【文章来源】：中国动物检疫. 2020,37(03)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
真核表达重组质粒双酶切验证结果
如图3所示，在荧光显微镜下，真核表达重组质粒pEF1α-Myc-HSP70、pEF1α-Myc-HSP40、pEF1α-Myc-RPL4转染组的HEK293T细胞均可观察到绿色荧光，而分别以鼠源Myc标签抗体为一抗的阴性对照组则无绿色荧光出现。2.4 Western-blot检测目的蛋白的表达
HSP70蛋白是一类非常保守的蛋白质，也是在HSPS家族中最重要的蛋白质之一。HSP70蛋白主要作为分子伴侣参与病毒的入侵过程[10]，可以稳定蛋白前体的构象，并保证蛋白质合成过程中的正确折叠。目前已有很多研究证明了HSP70蛋白可以与多种病毒蛋白发生相互作用，从而影响其入侵过程。例如：猪源HSP70蛋白被证明可与猪瘟病毒NS5A蛋白发生相互作用[4]；蚊子体内的HSP70蛋白可以与乙型脑炎病毒复制复合体相互作用，并参与该病毒的内吞过程[11-12]；鼠源HSP70蛋白还可以与乙型脑炎病毒E蛋白相互作用，而人源HSP70蛋白可以与登革热病毒蛋白等发生相互作用[5]。HSP40蛋白也是HSPS家族中重要的成员之一，其功能与HSP70蛋白具有一定关联，可协助HSP70蛋白更好地发挥其生物功能，同时该蛋白还具有修复变性蛋白质的功能[13]。本研究所选用的DNAJB6蛋白是禽源HSP40蛋白的一种，同样是一种具有分子伴侣功能的蛋白质。关于HSP40蛋白与病毒蛋白发生相互作用的研究也取得了一些进展，如：人源HSP40蛋白被证明可以与黄热病毒的非结构蛋白NS3和NS4A相互作用，从而促进病毒复制复合体的形成[14]；猪源HSP40蛋白还可以与猪圆环病毒的Cap蛋白相互作用[15];HSP70、HSP90、HSP40蛋白三者可以和免疫亲和素蛋白构成复合体，并与微管结合进入核转运过程[16]。总而言之，HSP70蛋白和HSP40蛋白均在病毒侵染过程中扮演着重要角色。
【参考文献】：
期刊论文
[1]热休克蛋白40、70、105β在三氧化二砷诱导的肝癌细胞系bel-7402凋亡中的作用[J]. 张宇阳,姜洪池,方冲,闫呈慧,付松滨. 中华肝胆外科杂志. 2004(07)
博士论文
[1]猪瘟病毒NS5A蛋白与HSP70的相互作用及引起细胞未折叠蛋白反应[D]. 张成成.西北农林科技大学 2015
硕士论文
[1]与IBDV VP2、VP3相互作用宿主细胞蛋白的筛选及鉴定[D]. 陈玉明.中国农业科学院 2014
本文编号：3319454
【文章来源】：中国动物检疫. 2020,37(03)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
真核表达重组质粒双酶切验证结果
如图3所示，在荧光显微镜下，真核表达重组质粒pEF1α-Myc-HSP70、pEF1α-Myc-HSP40、pEF1α-Myc-RPL4转染组的HEK293T细胞均可观察到绿色荧光，而分别以鼠源Myc标签抗体为一抗的阴性对照组则无绿色荧光出现。2.4 Western-blot检测目的蛋白的表达
HSP70蛋白是一类非常保守的蛋白质，也是在HSPS家族中最重要的蛋白质之一。HSP70蛋白主要作为分子伴侣参与病毒的入侵过程[10]，可以稳定蛋白前体的构象，并保证蛋白质合成过程中的正确折叠。目前已有很多研究证明了HSP70蛋白可以与多种病毒蛋白发生相互作用，从而影响其入侵过程。例如：猪源HSP70蛋白被证明可与猪瘟病毒NS5A蛋白发生相互作用[4]；蚊子体内的HSP70蛋白可以与乙型脑炎病毒复制复合体相互作用，并参与该病毒的内吞过程[11-12]；鼠源HSP70蛋白还可以与乙型脑炎病毒E蛋白相互作用，而人源HSP70蛋白可以与登革热病毒蛋白等发生相互作用[5]。HSP40蛋白也是HSPS家族中重要的成员之一，其功能与HSP70蛋白具有一定关联，可协助HSP70蛋白更好地发挥其生物功能，同时该蛋白还具有修复变性蛋白质的功能[13]。本研究所选用的DNAJB6蛋白是禽源HSP40蛋白的一种，同样是一种具有分子伴侣功能的蛋白质。关于HSP40蛋白与病毒蛋白发生相互作用的研究也取得了一些进展，如：人源HSP40蛋白被证明可以与黄热病毒的非结构蛋白NS3和NS4A相互作用，从而促进病毒复制复合体的形成[14]；猪源HSP40蛋白还可以与猪圆环病毒的Cap蛋白相互作用[15];HSP70、HSP90、HSP40蛋白三者可以和免疫亲和素蛋白构成复合体，并与微管结合进入核转运过程[16]。总而言之，HSP70蛋白和HSP40蛋白均在病毒侵染过程中扮演着重要角色。
【参考文献】：
期刊论文
[1]热休克蛋白40、70、105β在三氧化二砷诱导的肝癌细胞系bel-7402凋亡中的作用[J]. 张宇阳,姜洪池,方冲,闫呈慧,付松滨. 中华肝胆外科杂志. 2004(07)
博士论文
[1]猪瘟病毒NS5A蛋白与HSP70的相互作用及引起细胞未折叠蛋白反应[D]. 张成成.西北农林科技大学 2015
硕士论文
[1]与IBDV VP2、VP3相互作用宿主细胞蛋白的筛选及鉴定[D]. 陈玉明.中国农业科学院 2014
本文编号：3319454
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3319454.html
