鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的重组表达及其间接ELISA方法的建立
发布时间：2021-08-06 14:27
鸡传染性贫血病毒（Chicken infectious anemia virus,CIAV）是一种临床上能够引起雏鸡再生障碍性贫血和全身淋巴组织萎缩为主要特征的鸡传染性贫血（Chicken infectious anemia,CIA）的病原体。CIAV会攻击鸡的免疫系统,不仅会引起其他病原继发感染,还会干扰重大疫病的免疫效果。该病可垂直传播,通过对种鸡进行抗体监测,及时发现并淘汰患病种鸡对于该病的防控至关重要。国外的商品化CIAV ELISA抗体检测试剂盒,价格昂贵,用于该病的抗体检测成本太高,而国内还没有相关的商品化检测产品。因此,本论文以CIAV的衣壳蛋白VP1为抗原,建立了一个特异性、敏感性、重复性较好的CIAV间接ELISA抗体检测方法,希望能够为CIAV的抗体检测和疫病净化提供一个重要工具。主要研究内容如下:1、利用杆状病毒表达系统表达重组VP1蛋白将构建好的含有VP1基因的转移质粒和杆状病毒基因组共转染sf 9细胞,以产生携带有VP1基因的重组杆状病毒,命名为BAC-VP1。通过光学显微镜可以观察到转染细胞相较于正常细胞而言,细胞体积变大,膨胀,初步判断细胞转染后形成了重组...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鸡传染性贫血病毒（CIAV）的电镜图片(Gelderblometal1989)
鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的重组表达及其间接ELISA方法的建立3图1-2CIAV的基因组模式图图1-2CIAVgenomemodelmap1.1.3流行病学1979年，CIAV在日本首次报道后，便一直存在于日本的商业鸡群中，始终难以得到净化和根除(Yuasaetal1985)。目前，CIAV在世界范围内广泛存在(Pope1991)。英国(McNultyetal1988)、瑞典(Engstrom1988)、南非(WichtandMaharaj1993)、印度(Natesanetal2006)、澳大利亚(McNultyetal1989)、美国(Lucioetal1990)、巴西(Brentanoetal1991)、阿根廷(Buscagliaetal1994)、墨西哥(Ledesmaetal2001)等国都有发现并分离的报道。1992年，我国崔现兰等人从哈尔滨肉鸡场中首次分离出该病毒(崔现兰etal1992)。我国山东、湖南、安徽、甘肃等多个省市地区均有该病的报道(Eltahiretal2011)。一项国内家禽疾病调查显示，中国五个省的农场中CIAV血清阳性率高达42％(Zhouetal1997)，2016-2017年广东省的CIAV阳性率达到了32.8%(Tanetal2020)。此外，在中国东南部的活禽市场上，该病毒的流行率高达87％(Ducatezetal2008)。CIAV容易与其他病原体混合感染，包括马立克氏病病毒（MDV），网状内皮病病毒（REV），禽白血病病毒（ALV），禽回旋病毒2（AGV2）和禽呼长孤病毒（ARV），并且混合感染是CIAV的主要感染类型(Yaoetal2019)。CIAV的自然宿主主要是鸡，不同年龄的鸡对CIAV均易感，但是以雏鸡感染率最高，尤其是1日龄的雏鸡。随着免疫器官的发育成熟，1-3周龄的鸡对该病引起贫血的易感性会逐渐降低(Goryoetal1985)。CIAV主要通过水平传播和垂直传播途径造成病毒的传染和扩大(YuasaandYoshida1983)，CIAV的垂直传播可能仅限于感染后相对较短的时期(Yuasaetal1983)，粪-口途径可能是水平传播的主要方式(Yuasaet
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文83材料和方法3.1实验材料3.1.1细胞、质粒、菌株、VP1基因Sf9昆虫细胞由华中农业大学钱平老师课题组馈赠；pOET5-EGFP质粒、pOET5-VP1质粒、pET-11a-VP2质粒、pET-28a(+)载体，均由本实验室保存；dnaK-danJ-grpE/groES-groEL、groES-groEL、dnaK-danJ-grpE、groES-groEL-tig、dnaK-danJ-grpE/groES-groEL-tig共5种分子伴侣蛋白的表达质粒，均由本实验室保存；大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α菌株，均由本实验室保存；以实验室前期分离的鸡传染性贫血病毒毒株的基因序列为基础，对VP1基因的N端截短120bp，送由天一辉远（武汉）生物科技有限公司进行大肠杆菌密码子优化后合成，合成的基因片段连接pET-28a载体，命名为pET-28a-VP1（40~499aa）。pET-28a(+)和pOET5的质粒图谱如图3-1所示。图3-1质粒图谱Fig.3-1Plasmidmapinthestudy
【参考文献】：
期刊论文
[1]禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病病毒nested-PCR检测方法的建立[J]. 李晓晗,房立春,李阳,崔治中,常爽,赵鹏. 中国家禽. 2017(10)
[2]鸡贫血病毒Taq Man探针荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 宋修庆,高宏雷,王晓艳,林欢,宇文延青,王永强,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2009(01)
[3]鸡传染性贫血病病毒的鉴定[J]. 崔现兰,幸桂香,吴东来,冯菊艳,李锋,曲立新. 中国畜禽传染病. 1992(06)
本文编号：3325943
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鸡传染性贫血病毒（CIAV）的电镜图片(Gelderblometal1989)
鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的重组表达及其间接ELISA方法的建立3图1-2CIAV的基因组模式图图1-2CIAVgenomemodelmap1.1.3流行病学1979年，CIAV在日本首次报道后，便一直存在于日本的商业鸡群中，始终难以得到净化和根除(Yuasaetal1985)。目前，CIAV在世界范围内广泛存在(Pope1991)。英国(McNultyetal1988)、瑞典(Engstrom1988)、南非(WichtandMaharaj1993)、印度(Natesanetal2006)、澳大利亚(McNultyetal1989)、美国(Lucioetal1990)、巴西(Brentanoetal1991)、阿根廷(Buscagliaetal1994)、墨西哥(Ledesmaetal2001)等国都有发现并分离的报道。1992年，我国崔现兰等人从哈尔滨肉鸡场中首次分离出该病毒(崔现兰etal1992)。我国山东、湖南、安徽、甘肃等多个省市地区均有该病的报道(Eltahiretal2011)。一项国内家禽疾病调查显示，中国五个省的农场中CIAV血清阳性率高达42％(Zhouetal1997)，2016-2017年广东省的CIAV阳性率达到了32.8%(Tanetal2020)。此外，在中国东南部的活禽市场上，该病毒的流行率高达87％(Ducatezetal2008)。CIAV容易与其他病原体混合感染，包括马立克氏病病毒（MDV），网状内皮病病毒（REV），禽白血病病毒（ALV），禽回旋病毒2（AGV2）和禽呼长孤病毒（ARV），并且混合感染是CIAV的主要感染类型(Yaoetal2019)。CIAV的自然宿主主要是鸡，不同年龄的鸡对CIAV均易感，但是以雏鸡感染率最高，尤其是1日龄的雏鸡。随着免疫器官的发育成熟，1-3周龄的鸡对该病引起贫血的易感性会逐渐降低(Goryoetal1985)。CIAV主要通过水平传播和垂直传播途径造成病毒的传染和扩大(YuasaandYoshida1983)，CIAV的垂直传播可能仅限于感染后相对较短的时期(Yuasaetal1983)，粪-口途径可能是水平传播的主要方式(Yuasaet
华中农业大学2020届硕士研究生学位（毕业）论文83材料和方法3.1实验材料3.1.1细胞、质粒、菌株、VP1基因Sf9昆虫细胞由华中农业大学钱平老师课题组馈赠；pOET5-EGFP质粒、pOET5-VP1质粒、pET-11a-VP2质粒、pET-28a(+)载体，均由本实验室保存；dnaK-danJ-grpE/groES-groEL、groES-groEL、dnaK-danJ-grpE、groES-groEL-tig、dnaK-danJ-grpE/groES-groEL-tig共5种分子伴侣蛋白的表达质粒，均由本实验室保存；大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α菌株，均由本实验室保存；以实验室前期分离的鸡传染性贫血病毒毒株的基因序列为基础，对VP1基因的N端截短120bp，送由天一辉远（武汉）生物科技有限公司进行大肠杆菌密码子优化后合成，合成的基因片段连接pET-28a载体，命名为pET-28a-VP1（40~499aa）。pET-28a(+)和pOET5的质粒图谱如图3-1所示。图3-1质粒图谱Fig.3-1Plasmidmapinthestudy
【参考文献】：
期刊论文
[1]禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病病毒nested-PCR检测方法的建立[J]. 李晓晗,房立春,李阳,崔治中,常爽,赵鹏. 中国家禽. 2017(10)
[2]鸡贫血病毒Taq Man探针荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 宋修庆,高宏雷,王晓艳,林欢,宇文延青,王永强,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2009(01)
[3]鸡传染性贫血病病毒的鉴定[J]. 崔现兰,幸桂香,吴东来,冯菊艳,李锋,曲立新. 中国畜禽传染病. 1992(06)
本文编号：3325943
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3325943.html
教材专著
