肝素C5异构酶的表达优化及分子改造

发布时间：2021-08-07 08:28

　　肝素和硫酸乙酰肝素是一类应用于临床抗凝血的糖胺聚糖。肝素葡萄糖醛酸C5异构酶（Heparosan-N-sulfate-glucuronate 5-epimerase,C5,EC 5.1.3.17）是肝素和硫酸乙酰肝素合成过程中重要的修饰酶,催化N-硫酸化肝素前体（N-sulfoheparosan）的D-葡萄糖醛酸（D-GlcA）上5号位羧基翻转生成L-艾杜糖醛酸（L-iduronic acid,L-IdoA）。文中以大肠杆菌Escherichia coli为宿主对斑马鱼来源的肝素葡萄糖醛酸C5异构酶基因Glce进行重组表达优化与分子改造。比较了3种不同的表达载体pET20b（+）、pET28a（+）和pColdⅢ对C5表达的差异情况,其中以嗜冷启动型载体pColdⅢ表达酶活最高,达到（1 873.61±5.42） U/L。为了进一步提高C5的可溶表达量,在N端融合促溶标签SET2后,可溶蛋白表达量比对照提高了50%,酶活达到（2 409.25±6.43） U/L。在此基础上,通过理性设计对底物结合口袋进行定点突变,获得最优突变体（V153R）的酶活和比酶活分别为（5 804.32±5.... 

【文章来源】：生物工程学报. 2020,36(07)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

不同载体对C5异构酶表达的影响

肝素C5异构酶纯化及突变体酶活

肝素C5异构酶突变体结构分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]肝素硫酸转移酶优化表达及其在动物源肝素硫酸化中的应用[J]. 周正雄,王兵兵,胥睿睿,李青,堵国成,康振.  生物工程学报. 2018(11)



本文编号：3327450