酵母破壁酶和蜗牛酶辅助TRIzol试剂法提取酿酒酵母总RNA

发布时间：2021-08-17 20:21

　　该研究以酵母破壁酶、蜗牛酶破碎酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞壁,再使用总核糖核酸（RNA）提取试剂（TRIzol）法提取酵母总RNA,通过对总RNA进行浓度与纯度的分析,比较酶处理对RNA提取的影响。结果表明,酵母破壁酶的最佳提取条件为加酶量37.5μL,提取温度27℃,提取时间15 min。在此最佳提取条件下,提取RNA质量浓度为1 079.05 ng/μL,A_{260 nm}/A_{280 nm}为2.10,A_{260 nm}/A_{230 nm}为2.15;蜗牛酶的最佳提取条件为加酶量30 mg/mL,提取温度37℃,提取时间30 min。在此最佳提取条件下,提取RNA质量浓度为1 673.39 ng/μL,A_{260 nm}/A_{280 nm}为1.99,A_{260 nm}/A_{230 nm}为1.81。结果显示,酵母破壁酶的提取效果优于蜗牛酶。 

【文章来源】：中国酿造. 2020,39(12)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

不同提取温度提取酵母总RNA电泳图

根据酵母破壁酶说明书，酵母破壁酶的最佳温育时间为1～2 h，而在预实验中发现当设置为45 min～2 h时，RNA浓度变化不大，但随着时间的延长，RNA降解严重。因此，适当调整温育时间为15～75 min。从表2可以看出，经酵母破壁酶处理后，不同酶处理时间下提取的RNA浓度均很高，在1 500 ng/μL以上，A260 nm/A280 nm和A260 nm/A230 nm均在2.0左右，说明基本无蛋白质或其他盐类等杂质污染。综合图2，泳道1,2,3均有亮度较高，条带较好的28S r RNA和18S r RNA条带，而泳道4,5可能由于酶处理时间太长，RNA降解，从而导致电泳图中几乎无条带出现。由于延长酶处理时间可能会使RNA降解，综合图3和表2，当酵母破壁酶处理15 min时RNA浓度和纯度均很高，因此，酵母破壁酶的最适提取时间为15 min。根据蜗牛酶的说明书，蜗牛酶温育1 h即可溶解酵母细胞壁，因此，设置蜗牛酶的温育时间为30～90 min。由表2可以看出，蜗牛酶处理后的核酸浓度很高，当提取时间>45 min时，核酸质量浓度在2 000 ng/μL以上，但A260 nm/A280 nm和A260 nm/A230 nm却不理想，均在2.0以下，说明有蛋白质或其他盐类等杂质污染，导致泳道7～10只有5S r RNA条带。当蜗牛酶的处理时间为30 min时，虽然核酸浓度相对较小，为1 108.209 ng/μL，但泳道6有28S r RNA和18S r RNA条带，只不过条带中伴随有小片段RNA的弥散带，可能是由于A260 nm/A230 nm在2.0以下，有其他裂解液杂质的残留造成的。综合图3和表2，蜗牛酶的最适提取时间为30 min。

为探究酿酒酵母GGSF16的生长情况，选取最佳的接种时间，使用分光光度计测定样品在波长600 nm处的吸光度值，结果见图1。由图1可以看出，酿酒酵母GGSF16在6～16 h处于对数生长期，选取10 h的菌体进行扩大培养。

【参考文献】：
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本文编号：3348432