微米管表面的CHA放大-竞争抑制策略用于区分单碱基突变

发布时间：2021-08-18 00:09

　　作为遗传信息的主要载体,DNA在生命系统中具有重要的传递信息作用,目前有等温扩增、微阵列、荧光杂交核酸探针、聚合酶链式反应（PCR）等方法可以检测样品中DNA的种类及含量。由于物理和基因疾病的影响,人类DNA序列会发生各种各样的变异导致基因分型,DNA或RNA序列中单碱基变异可能导致严重的生理后果,因此开发新的检测手段用于区分单核苷酸水平上的DNA序列就变得十分重要。我们合理地设计杂交探针,提高杂交探针选择性识别SNV的能力。一个理想的探针可以只与目标链杂交,而不与突变链杂交,为了构建这种程序化的催化信号放大体系,我们在微米管波导检测平台的基础上,将催化harpin探针自组装体系（CHA）与竞争抑制体系结合,对let-7家族中的let-7a、let-7c、let-7e、let-7f进行区分。我们证明了在这种复合体系下miRNA与探针选择性杂交的效率高于单一体系,区分因子提高了10倍左右,检测极限低至15fM。最后,我们使用该体系对胰腺癌、肺癌、卵巢癌和胃癌患者的血清进行直接检测,实验结果表明放大-竞争体系的微米管平台可以灵敏的区分出健康人与病人的血清,并且可以对患者类型进行初步诊断分析... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１?ＳＹＢＲ?Ｇｒｅｅｎ染料插入双链ＤＮＡ??

图１．２?ＴａｑＭａｎ探针法??

３丨丨丨丨丨１１丨丨丨丨丨１丨丨山?丨＂丨！丨１丨丨丨！＂丨丨丨丨丨丨ｉ！ｉ！ｉ丨丨）丨丨「??图１．２?ＴａｑＭａｎ探针法??１．３．１．２链置换放大（ＳＤＡ）??在生物体中，碱基切除修复是通过切开受损磷酸二酯键完成的，缺失的部分??由ＤＮＡ聚合酶重新合成，ＤＮＡ连接酶密封切口。ＳＤＡ利用这一反应过程，使??ＰＣＲ扩增反应可以在恒温下进行。基本流程为：引物１在５’端有一个突起，用??于识别Ｈｉｎｄｉ核酸外切酶；引物２用来连接引物１的两端。每一个热变形的ｓｓＤＮＡ??模板都会连接２个不同的引物，引物１在ＥｓｃｈｅｒｉｃｉａｃｏｌｉＤＮＡ聚合酶的作用下向??着ＨｉｎｃＩＩ核酸外切酶的识别位点延伸，同时引物２聚合取代引物１端起始的新??链，取代的链在下一轮循环中作为模板。第二轮循环中，在Ｈｉｎｄｉ识别序列两端??产生的双链１Ｃ分子，最终合为一体。核酸外切酶继续剪切末端，ｅｘｏ＿?Ｋｌｅｎｏｗ引??发聚合


本文编号：3348788