m 6 A修饰对小鼠小脑发育的调控作用研究
发布时间：2021-08-20 16:48
m6A是一种在mRNA和非编码RNAs中广泛存在的,动态且可逆的甲基化修饰。在神经发育以及神经环路形成等过程中m6A修饰发挥着调控作用。但是,现进行的研究主要是对m6A的甲基化修饰酶“writers（刻写器）”和去甲基化修饰酶“erasers（擦除器）”的研究,而对m6A修饰的识别和结合蛋白“readers（阅读器）”的研究很少,具体在m6A修饰调控小脑发育的研究中,其readers的功能和机制目前还未见报道。本课题利用神经系统特异性表达的Nestin-cre敲除m6A的writer METTL14,发现METTL14敲除后的小鼠体型明显变小,小脑萎缩。鉴于敲除writer后导致严重的小脑发育缺陷,说明m6A修饰对于小脑发育至关重要。我们分别在小脑的两类主要神经元即浦肯野细胞和颗粒细胞中分别研究m6A修饰,本课题主要集中研究m6A修饰对浦肯野细胞发育和功能的调控作用和机制。本课题利用Rosa...
【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RosamT/mG小鼠在Cre阳性细胞中表达GFP的机制[86]
哈尔滨工业大学工程硕士学位论文-19-3.2L7-cre表达谱确定实验方法（1）交配鉴定将L7-cre+/-小鼠与异性Rosa26mT/mG基因型小鼠交配，取不同时期的cre阳性和cre阴性小鼠。（2）切片观察P0开始鉴定观察，通过小鼠灌流固定，脱水，包埋，切片后，直接加DAPI封闭不需要孵抗体，直接可以直接在荧光显微镜下观察，一直至观察到cre阳性有GFP表达，同时对照cre阴性为无GFP表达，并且在其后的几个时期也都有GFP表达，则第一次观察到的时期即为L7-cre的表达时间。3.3L7-cre表达谱确定结果如图3-2所示，绿色通道是GFP表达，蓝色通道是DAPI标记细胞核，Merge是两个通道的合并，发现在P0时期cre阳性GFP就已经开始表达，同窝小鼠cre阴性作为对照没有GFP表达。3.4Pcp2-cre表达谱确定实验方法（1）交配鉴定将Pcp2-cre+/-基因型小鼠与异性Rosa26mT/mG基因型小鼠交配，取不同时期的cre阳性和cre阴性小鼠分析。图3-2L7-cre+/-,Rosa26mT/mG小鼠小脑GFP表达结果图（图中scalebar为200μm）
哈尔滨工业大学工程硕士学位论文-20-（2）切片观察P0开始观察，通过收集小鼠灌流固定，脱水，包埋，切片后，直接加DAPI封闭液指甲油封片不需要孵抗体，直接可以直接在荧光共聚焦显微镜下观察，一直至观察到cre阳性有GFP表达，同时对照cre阴性为无GFP表达，并且在其后的几个时期也都有GFP表达，则第一次观察到的时期即为Pcp2-cre的表达时间。3.5Pcp2-cre表达谱确定结果如图3-3所示，Pcp2-cre+/-与异性Rosa26mT/mG小鼠交配，收集P5、P7和P8，可以看到P5野生型和cre阳性都还未表达GFP，在P7时才开始表达GFP，同窝小鼠cre阴性作为对照没有GFP表达，P8时期阳性表达GFP，同窝小鼠阴性对照不表达GFP。Pcp2-cre表达最早在P7，晚于L7-cre表达时期，但是由于L7/Pcp2是同一个基因，只是cre插入的外显子不同，所以我们也对Pcp2-cre进行了分析。3.6本章小结本章主要是确定了在浦肯野细胞中特异性表达的cre的表达时间，本章实验选择了能够在小鼠小脑浦肯野细胞中特异性表达的L7-cre和Pcp2-cre，利用Rosa26mT/mG报告基因鼠与L7-cre和Pcp2-cre小鼠杂交，表达GFP来确定在小鼠小脑中的表达谱，研究后发现L7-cre最早表达是在P0时期，而Pcp2-cre最早表达是图3-3Pcp2-cre+/-,Rosa26mT/mG小鼠小脑GFP表达结果图（图中scalebar为200μm）
【参考文献】：
期刊论文
[1]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang. Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)
本文编号：3353862
【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RosamT/mG小鼠在Cre阳性细胞中表达GFP的机制[86]
哈尔滨工业大学工程硕士学位论文-19-3.2L7-cre表达谱确定实验方法（1）交配鉴定将L7-cre+/-小鼠与异性Rosa26mT/mG基因型小鼠交配，取不同时期的cre阳性和cre阴性小鼠。（2）切片观察P0开始鉴定观察，通过小鼠灌流固定，脱水，包埋，切片后，直接加DAPI封闭不需要孵抗体，直接可以直接在荧光显微镜下观察，一直至观察到cre阳性有GFP表达，同时对照cre阴性为无GFP表达，并且在其后的几个时期也都有GFP表达，则第一次观察到的时期即为L7-cre的表达时间。3.3L7-cre表达谱确定结果如图3-2所示，绿色通道是GFP表达，蓝色通道是DAPI标记细胞核，Merge是两个通道的合并，发现在P0时期cre阳性GFP就已经开始表达，同窝小鼠cre阴性作为对照没有GFP表达。3.4Pcp2-cre表达谱确定实验方法（1）交配鉴定将Pcp2-cre+/-基因型小鼠与异性Rosa26mT/mG基因型小鼠交配，取不同时期的cre阳性和cre阴性小鼠分析。图3-2L7-cre+/-,Rosa26mT/mG小鼠小脑GFP表达结果图（图中scalebar为200μm）
哈尔滨工业大学工程硕士学位论文-20-（2）切片观察P0开始观察，通过收集小鼠灌流固定，脱水，包埋，切片后，直接加DAPI封闭液指甲油封片不需要孵抗体，直接可以直接在荧光共聚焦显微镜下观察，一直至观察到cre阳性有GFP表达，同时对照cre阴性为无GFP表达，并且在其后的几个时期也都有GFP表达，则第一次观察到的时期即为Pcp2-cre的表达时间。3.5Pcp2-cre表达谱确定结果如图3-3所示，Pcp2-cre+/-与异性Rosa26mT/mG小鼠交配，收集P5、P7和P8，可以看到P5野生型和cre阳性都还未表达GFP，在P7时才开始表达GFP，同窝小鼠cre阴性作为对照没有GFP表达，P8时期阳性表达GFP，同窝小鼠阴性对照不表达GFP。Pcp2-cre表达最早在P7，晚于L7-cre表达时期，但是由于L7/Pcp2是同一个基因，只是cre插入的外显子不同，所以我们也对Pcp2-cre进行了分析。3.6本章小结本章主要是确定了在浦肯野细胞中特异性表达的cre的表达时间，本章实验选择了能够在小鼠小脑浦肯野细胞中特异性表达的L7-cre和Pcp2-cre，利用Rosa26mT/mG报告基因鼠与L7-cre和Pcp2-cre小鼠杂交，表达GFP来确定在小鼠小脑中的表达谱，研究后发现L7-cre最早表达是在P0时期，而Pcp2-cre最早表达是图3-3Pcp2-cre+/-,Rosa26mT/mG小鼠小脑GFP表达结果图（图中scalebar为200μm）
【参考文献】：
期刊论文
[1]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang. Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)
本文编号：3353862
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3353862.html
教材专著
