星星草PutACBP6基因表达特征与PutGLP2基因功能初步分析

发布时间：2021-08-20 23:33

　　酰基辅酶A结合蛋白是一类含有酰基辅酶A结合结构域ACB的蛋白,参与脂质合成和分解、酰基辅酶A稳态等多种生理过程。类萌发素蛋白GLP是一类具有cupin结构域的种子萌发标记蛋白。它以酶、结构蛋白和受体的形式参与多种生理生化过程。这两类蛋白在植物的生长发育、生物和非生物胁迫应答中起重要的作用,但在盐碱应答过程中的作用机制未见报道。星星草是一种耐盐碱能力极强的盐生单子叶植物,是研究植物盐碱应答机制的理想材料。本研究利用生物信息学手段和分子遗传学技术从星星草中分别克隆到PutACBP6和PutGLP2基因。PutACBP6开放阅读框为161bp,编码536个氨基酸,隶属于ABPⅢI亚类,包含1个信号肽和1个ACB结构域。RT-qPCR分析表明PutACBP6在星星草根、茎、叶、叶鞘、花、穗和种子均有表达,在星星草根、花、穗中表达较高,在种子中表达最低。逆境胁迫下（200 mmol/L NaCl、100 mmol/L NaHC03、75mmol/L Na2C03、10 mmol/L H202和4℃）,根和叶中的PutA,CBP6均呈现上调表达,暗示PutACBP6可能参与了盐、碱、氧化、低温胁迫... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

多种植物CLp氮基酸序列比对1671

３－１?）。利用ＴＡＫＡＲＡ?ＲＡＣＥ试剂盒合成５’ＲＡＣＥ?ｃＤＮＡ及３’ＲＡＣＥ?ｃＤＮＡ，根据己知序列设计??ＲＡＣＥ引物（表２－１），利用ＲＡＣＥ技术经两轮巢式ＰＣＲ扩增获得符合的ＰＷＬ４Ｃ５Ｐ６的５’端和??３’端片段（图３－２），进行测序。用ＤＮＡＭＡＮ将测序结果与已知序列进行拼接，获得全序??列。将该序列翻译后进行ＮＣＢＩ?ＢＬＡＳＴＰ比对，确定测序结果为ＰＷＬ４ＣＡＰ６。根据确定的??序列ＯＲＰ设计引物Ａ６－Ｆ、Ａ６－Ｒ?（表２－１），对其进行克隆（图３－３）。??图３－１星星草根和叶总ＲＮＡ鉴定??１：星星草叶片ＲＮＡ；?２：星星草根部ＲＮＡ??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｉｎ?ｒｏｏｔ?ａｎｄ?ｌｅａｖｅｓ?ｏｆ?Ｐｕｃｃｉｎｅｌｌｉａ?ｔｅｎｕｉｆｌｏｒａ??１：?ｔｈｅ?ＲＮＡ?ｏｆ?ｌｅａｆ?＆ｏｍ?Ｐｕｃｃｉｎｅｌｌｉａ?ｔｅｎｕｉｆｌｏｒａ，?２：?ｔｈｅ?ＲＮＡ?ｏｆ?ｒｏｏｔ?ｆｒｏｍ?Ｐｕｃｃｉｎｅｌｌｉａ?ｔｅｎｕｉｆｌｏｒａ??Ａ?Ｍ?１?Ｂ?Ｍ?１?Ｃ?Ｍ?１?２?３?４??＿??ｍｍ４?１??瞧ｆ静．．邏??图?３－２?５’ＲＡＣＥ?及?３’ＲＡＣＥ?巢式?ＰＣＲ??（Ａ）以５’ｒａｃｅｌ和Ａ６－５１为引物进行ＰＣＲ的结果，Ｍ：?ＤＬ２０００，１：?ＰＣＲ结果（Ｂ）以??５’ｒａｃｅ２和Ａ６－５２为引物进行ＰＣＲ的结果，Ｍ：?ＤＬ１５０００，１：?ＰＣＲ结果（Ｃ）分别以Ｑ〇、??ＡｅＧＳＰｊＨＱｉ、Ａ６ＧＳＰ２?为引物进行?ＰＣＲ?的结果，Ｍ：?ＤＬ２０００，?１、２：?Ｑ〇?和人６０８卩１的？〇１??结果

Ｍ：?ＤＬ２０００；?１－２：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｏｆ?ＰｕｔＡＣＢＰ６?ｇｅｎｅ??对测序结果分析表明，星星草基因开放读码框长度为１６１１?ｂｐ，编码５３６个氨??基酸，含有一个ＡＣＢＰ结构域（图３－４）。对其编码的蛋白质进行分析发现，ＰｕｔＡＣＢＰ６分子??式为Ｃ２４６９Ｈ３９４８Ｎ６９２０?８４８Ｓ９，蛋白质分子量为５７．１８３?ｋＤａ，等电点为４．４５，酸性氨基酸（天冬氨??酸和谷氨酸）１０７个，碱性氨基酸（精氨酸和赖氨酸）５０个，是一种酸性蛋白质，不稳定指??数为５１．０５，推测ＰｕｔＡＣＢＰ６是一种不稳定蛋白，氨基酸亲水性平均值（Ｇｒａｎｄ?ａｖｅｒａｇｅ?ｏｆ??矽（１１＾３沉（：办，０１１＾丫）为－０．５１３，表明其为亲水性蛋白。利用８０？１＾八对？过０１＾２的二级??结构分析发现，蛋白二级结构主要由无规卷曲（ｒａｎｄｏｍ?ｃｏｉｌ）?（３５．６３％）、ａ螺旋（ａ－ｈｅｌｉｘ）??（５２．２４％）、延伸链（ｅｘｔｅｎｄｅｄ?ｃｈａｉｎ）?（８．７７％）和?ｐ?转角（Ｐ－ｔｕｍ）?（３．３６％）组成（图?３－??５）?．ＰｕｔＡＣＢＰ６具有一个氨基端信号肽，在第２８位天冬酰胺处被剪切（图３－６）。??Ｂｌａｓｔ分析，发现与二穗短柄草序列相似性最高，??约为６４％


本文编号：3354423