膜蛋白PAN-1参与调控转录因子MYRF在发育中的入核

发布时间：2021-08-21 04:39

　　发育中的神经回路在趋向成熟的过程中会经历精细化,包括新的突触产生、存在的突触消除,这些变化称为突触重塑,它们促使神经系统成为高效的功能性网络,而目前对突触重塑的分子细胞机理所知有限。秀丽隐杆线虫（C.elegans）的DD类型GABA运动神经元具有显著的突触重塑过程。在线虫的L1时期,DD神经元的突触存在于腹侧分支,其背侧分支具有树突功能。随着发育进行,DD神经元在L1末期从其背侧分支形成突触,同时早期的腹侧突触逐渐消除。我们借助DD神经元这种突触重塑现象来探索突触重塑的分子机制。实验室前期研究表明髓鞘转录因子MYRF家族蛋白myrf-1和myrf-2对突触重塑具有关键的促进功能。全长MYRF是个跨膜蛋白,它能够被剪切而释放N端入核。通过免疫沉淀和质谱分析,鉴别出另一跨膜蛋白PAN-1能与MYRF结合,并发现PAN-1对于突触重塑必不可少。遗传互作分析表明myrf是pan-1的下游基因。但PAN-1和MYRF的互作意味着什么、PAN-1缺失如何影响MYRF的功能、对DD神经元的突触重塑产生何种影响?本论文就这些问题的机制进行了探究。通过分析由CRISPR构建的PAN-1::GFP敲入品... 

【文章来源】：杭州师范大学浙江省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1：图示6个DD型GABA运动神经元的位置和形态，也显示突触前和突触后成分的重

图 1.2rf-1, myrf-2 对线虫 DD 神经元突触重塑调控机制模式图[39]实验室在 2017 年杂志发表的文章里，揭示了髓鞘调节转录,myrf-2 在神经元重塑过程中起重要的调节作用。分析表明 mallele 表型，发现不管是 myrf-1(0)还是 myrf-2(0)，他们 DD正常的，但当把两个突变杂交到一起的时候，他们的 DD 神受抑制的表型。MYRF 蛋白质全长在定位的内质网膜上，结构域，能够被丝氨酸-赖氨酸二分体结构识别，并对 MY之后分为游离的 N 端和留在内质网膜上的 C 端。剪切下来序列和 DNA 结合域，紧接着，N 端入核，与调控 DD 神经互作用，启动相关基因的转录[39]。模式图见图 1.2。1对DD神经元突触重塑必不可少

传互作分析表明 myrf 是 pan-1 的下游基因（王超，夏诗丽，未发表）。但 PAN-1和 MYRF 的互作意味着什么、PAN-1 缺失如何影响 MYRF 的功能、对 DD 神经元的突触重塑产生何种影响？本论文就这些问题的机制进行了探究。4.1 PAN-1的定位4.1.1 pan-1荧光标签品系的构建通过 CRISPR-Cas9 技术，我们实验室之前成功实现了 pan-1 基因中 GFP 的敲入。其对应品系号为 BLW1258。4.1.2 PAN-1b::GFP定位于细胞膜上和细胞质中将上述实验室之前构建好的內源表达的 PAN-1b::GFP 线虫品系进行拍照观察，它的结果如图 4.1 所示：PAN-1b::GFP


本文编号：3354893