蜡样芽孢杆菌ClpP蛋白酶影响生物膜形成、芽孢产生和运动性的作用机制

发布时间：2021-08-23 19:08

　　ClpP蛋白酶在原核和真核细胞中广泛存在,发挥重要的生理功能。ClpP的功能主要包括参与细胞内蛋白质量控制以维持细胞内蛋白稳定和调节细胞发育这两个方面。在模式细菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中,ClpP蛋白酶参与该细菌的生长、芽孢产生和生物膜形成等重要生理过程。该蛋白在蜡样芽孢杆菌（B.cereus）中的功能尚缺乏深入研究。利用根际微生物控制植物病害是植物病害综合治理的重要组成部分。生防微生物在自然环境的稳定存在是其发挥生防作用的前提。蜡样芽孢杆菌0-9是一株从健康小麦根部分离获得的一株生防菌株,对小麦纹枯病具有防治效果。研究蜡样芽孢杆菌的生物膜形成和芽孢产生等分子机制,揭示其环境适应性,有助于提高生物防治效果。通过生物信息学分析B.cereus 0-9的基因组序列,发现在0-9基因组中存在2个枯草芽孢杆菌clpP基因的同源基因,分别命名为:clpP1,clpP2。在实验室前期构建的?clpP1,?clpP2单敲除菌株的基础上,利用基因同源重组构建clpP1和clpP2的双敲除菌株?clpP1?clpP2。通过测定不同基因敲除菌株的表型,结果显示,与野生型菌株0-... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pMAD-chi质粒图谱

3 结果分析3.1 基因缺陷型菌株的构建.1.1 基因缺陷型菌株敲除载体的验证 B.cereus 0-9 基因组为模板， PCR 分别扩增出目的基因开放阅读框（ORF）的和下游片段，上下游片段分别单酶切，80℃灭活 10 min 后。将上下游片段nI 连接酶连接，以连接产物为模板，用上游片段的正向引物和下游片段的反向，扩增产物经双酶切后插入 pMAD-T7 载体的多克隆位点，构建基因敲除载体段经测序确认敲除载体的正确性，证明敲除载体构建成功。

图 b 是 spx2 菌株的验证，M 表示 DNAMarker，1 代表野生型菌株 PCR kb，2 代表 spx2 基因组 PCR 扩增，条带为 2.0 kb。图 c 是 spx1 spx2 菌株的验证，M 表示 DNAMarker，1 代表野生型菌株增，条带为 2.8 kb，2 代表 clpP1 基因组 PCR 扩增，条带为 2.0 kb。图 d 为 clpP1 clpP2 菌株的验证，M 表示 DNAMarker，1 代表野生型菌扩增，条带为 2.5 kb，2 代表 clpP1 clpP2 基因组 PCR 扩增，条带为 1陷型菌株构建成功。将验证正确的缺陷型菌株基因组大量扩增回收，D19(Simple)进行测序，再次验证其正确性。

【参考文献】：
硕士论文
[1]蜡样芽孢杆菌蛋白质量控制系统ClpX/Hsp100家族组分的生理功能分析[D]. 熊曦.河南大学 2017



本文编号：3358429