Aft型番茄遗传转化及花青素合成相关转录因子表达分析
发布时间：2021-08-24 11:13
Aft型番茄是由番茄野生种L.chilense与番茄栽培种Solanum lycopersicum杂交获得的,其果实在光下可以诱导合成花青素。花青素合成途径由MYB转录因子、bHLH转录因子、WD40蛋白形成的MBW复合物调控,但是番茄中不同组织部位花青素合成调控网络仍不十分清晰。为探究Aft型番茄花青素合成的关键调控因子之间的表达关系,及它们参与不同组织花青素合成的调控网络,本论文以Aft型番茄为试材,建立遗传转化体系。通过实时荧光定量PCR检测花青素合成相关MYB类（SlANT1、SlANT1-like、SlAN2、SlAN2-like）、bHLH类（SlJAF13、SlAN1）转录因子在根、茎、叶、子叶、下胚轴、花瓣、萼片、果皮等组织部位表达量。运用农杆菌转化法将SlAN2p::GUS、SlAN2-likep::GUS、SlJAF13p::GUS、SlAN1p::GUS等载体转入Aft型番茄中,通过组织化学染色判断其在不同组织的表达情况,进一步分析转录因子不同组织表达模式。此外,本研究成功建立了Aft型番茄CRISPR/Cas9基因编辑体系,并对bHLH类转录因子SlAN1进行基...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１番茄中花青素合成代谢途径??注：ＰＡＬ?（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ?ａｍｍｏｎｉａ－ｌｙａｓｅ）：苯两氨酸裂解酶；Ｃ４Ｈ?（ｃｉｎｎａｍａｔｅ４－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）：肉桂??酸轻化酶；４ＣＬ?（４－ｃｏｕｍａｒａｔｅｃｏｅｎｚｙｍｅＡｌｉｇａｓｅ）：?４－香豆酷辅酶?Ａ?连接酶；ＣＨＳ?（ｃｈａｌｃｏｎｅ??－??
１祁型番茄遗传转化体系的筛选??２．４．１．１?Ｚｔ与ＩＡＡ配比及外植体类型对分化再生的影响??在ＭＳ培养基中添加适量细胞分裂素和生长素可以促进愈伤组织分化及诱导生芽，??本试验运用的细胞分裂素为玉米素（Ｚｔ），生长素为吲哚乙酸（ＩＡＡ），Ｚｔ浓度设置为??０．５ｍｇ／Ｌ、ｌｍｇ／Ｌ、１．５ｍｇ／Ｌ、２ｍｇ／Ｌ、２．５ｍｇ／Ｌ，ＩＡＡ?浓度为?０．１ｍｇ／Ｌ，相关培养基编??号Ａ－Ｅ。接种于培养基上的子叶５?ｄ后明显增大，１５?ｄ后有愈伤生成，３０?ｄ左右于子叶??两端切口处生芽。如图２－１可以看出，Ａ、Ｂ培养基诱导出芽最多且芽长势较好；Ｅ培??养基中出芽也较多；Ｃ、Ｄ培养基出芽数较少，同期相比出芽速度较慢。如表２－１２统计??Ａ培养基出芽率最多为８０％，?Ｂ培养基出芽率与之差异不大为７５．６％，?Ｃ、Ｄ培养基出??芽率较少分别为２４．４％和３１．３％，?Ｅ培养基出芽率与Ｃ、Ｄ相比有所生高，为６３．３％。因??此Ａ培养基即Ｚｔ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ?０．１?ｍｇ／Ｌ的培养基对于型番前子叶分化效果最好。??ＫＩ??ｍ??ｍ??图２－１?Ｚｔ与ＩＡＡ浓度诱导番茄子叶生芽??表２－１２?Ｚｔ与ＩＡＡ浓度对番茄子叶诱导生芽的影响??激素浓度（ｍｇ／Ｌ）?子叶数（个）?出芽数（个）?出芽率（％）????Ｚｔ?ＩＡＡ????￣Ａ?０５?〇７ｌ?９０?７２?８０￣??Ｂ?１?０．１?９０?６８?７５．６??Ｃ?１．５?０．１?９０?２２?２４．４??Ｄ?２?０．１?９０?２８?３１．１???Ｅ?Ｚ５?ＯＡ?９０?５７?６３３???－１４－??
?２农杆菌介导的Ａｆｔ型番茄遗传转化体系的建立???下胚轴作为外植体的分化试验中，接种于培养基上的下胚轴１５?ｄ后有愈伤生成，３０??ｄ后于切口处出芽。如图２－２可以看出，Ａ、Ｂ培养基诱导出芽最多，Ｃ、Ｄ、Ｅ培养基??则诱导出芽较少。如表２－１３统计Ａ培养基出芽率为６７．８％，出芽率最高；其次为Ｂ培??养基，出芽率为６２．２％；?Ｃ培养基出芽率最低，为３６．７％；?Ｄ、Ｅ培养基出芽率有所升??高，分别为４２．２％和４６．７％。因此Ｚｔ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋?ＩＡＡ?０．］?ｍｇ／Ｌ为＃／型番茄下胚轴诱导??生芽最佳激素配比。??子叶与下胚轴相比在２１０．５：１１§几＋１八八０．１〇＾几激素配比下出芽率更高，同时由于??下胚轴在离体时需用刀处理，且需在滤纸上操作，较易污染，且据其他关于番茄遗传转??化研究表明，下胚轴在筛选处理时，假阳性较高，因此本试验后续试验采取子叶作为外??植体。??■＾丄?ｊｉ??图２－２?Ｚｔ与ＩＡＡ浓度诱导番茄下胚轴生芽??表２－１３?Ｚｔ与１ＡＡ浓度对番前下胚轴诱导生芽的影响??激素浓度（ｍｇ／Ｌ）?下胚轴数（个）?出芽数（个）?出芽率（％）￣???Ｚｔ?ＩＡＡ???０５?ＯＡ?９０?６１?６７．８??Ｂ?１?０．１?９０?５６?６２．２??Ｃ?１．５?０．１?９０?３３?３６．７??Ｄ?２?０．１?９０?３８?４２．２???Ｅ?Ｚ５?ＯＡ?９０?４２?４６．７??２．４．１．２卡那霉素浓度对外植体生长状况的影响??卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素，它可以有效筛选转基因番茄幼苗，采用的卡那霉??素浓度过高会
【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导的番茄遗传转化体系优化[J]. 卜璐璐,赵凯,杨荣萍,罗兴会,李清云,杨正安. 江苏农业科学. 2019(09)
[2]番茄花粉管通道遗传转化方法[J]. 金晓霞,李婉婷,于丽杰. 分子植物育种. 2013(04)
[3]花粉管通道法在番茄转基因上的应用[J]. 陈冬朋,于丽杰. 北方园艺. 2010(14)
[4]农杆菌介导的番茄Micro-Tom遗传转化体系的建立[J]. 陈双臣,刘爱荣,王凤华,王菲,周洲. 华北农学报. 2010(02)
[5]Transgenic expression of DwMYB2 impairs iron transport from root to shoot in Arabidopsis thaliana[J]. Yan-Hong Chen~(1,2,3) Xue-Min Wu~5 Hong-Qing Ling~4 Wei-Cai Yang~1 ~1The Key Laboratory of Molecular and Developmental Biology,Institute of Genetics and Developmental Biology,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101 China;~2Graduate University of the Chinese Academy of Sciences,19 Yuquan Road,Beijing 100049,China;~3School of Life Science,Nantong University,Nantong 226007 China; ~4The State Key Laboratory of Plant Cell and Chromosome Engineering,Institute of Genetics and Developmental Biology,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China. Cell Research. 2006(10)
[6]玉米素和IAA对番茄子叶再生的影响[J]. 欧阳波,李汉霞,叶志彪. 植物生理学通讯. 2003(03)
硕士论文
[1]番茄SlHY5基因在低温胁迫中的作用[D]. 张田田.西北农林科技大学 2016
[2]番茄再生体系和转化体系的优化研究[D]. 王婷婷.山西农业大学 2013
[3]Miro-Tom番茄高效遗传转化体系建立及转INH基因植株的获得[D]. 郭旻.沈阳农业大学 2012
本文编号：3359880
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１番茄中花青素合成代谢途径??注：ＰＡＬ?（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ?ａｍｍｏｎｉａ－ｌｙａｓｅ）：苯两氨酸裂解酶；Ｃ４Ｈ?（ｃｉｎｎａｍａｔｅ４－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）：肉桂??酸轻化酶；４ＣＬ?（４－ｃｏｕｍａｒａｔｅｃｏｅｎｚｙｍｅＡｌｉｇａｓｅ）：?４－香豆酷辅酶?Ａ?连接酶；ＣＨＳ?（ｃｈａｌｃｏｎｅ??－??
１祁型番茄遗传转化体系的筛选??２．４．１．１?Ｚｔ与ＩＡＡ配比及外植体类型对分化再生的影响??在ＭＳ培养基中添加适量细胞分裂素和生长素可以促进愈伤组织分化及诱导生芽，??本试验运用的细胞分裂素为玉米素（Ｚｔ），生长素为吲哚乙酸（ＩＡＡ），Ｚｔ浓度设置为??０．５ｍｇ／Ｌ、ｌｍｇ／Ｌ、１．５ｍｇ／Ｌ、２ｍｇ／Ｌ、２．５ｍｇ／Ｌ，ＩＡＡ?浓度为?０．１ｍｇ／Ｌ，相关培养基编??号Ａ－Ｅ。接种于培养基上的子叶５?ｄ后明显增大，１５?ｄ后有愈伤生成，３０?ｄ左右于子叶??两端切口处生芽。如图２－１可以看出，Ａ、Ｂ培养基诱导出芽最多且芽长势较好；Ｅ培??养基中出芽也较多；Ｃ、Ｄ培养基出芽数较少，同期相比出芽速度较慢。如表２－１２统计??Ａ培养基出芽率最多为８０％，?Ｂ培养基出芽率与之差异不大为７５．６％，?Ｃ、Ｄ培养基出??芽率较少分别为２４．４％和３１．３％，?Ｅ培养基出芽率与Ｃ、Ｄ相比有所生高，为６３．３％。因??此Ａ培养基即Ｚｔ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ?０．１?ｍｇ／Ｌ的培养基对于型番前子叶分化效果最好。??ＫＩ??ｍ??ｍ??图２－１?Ｚｔ与ＩＡＡ浓度诱导番茄子叶生芽??表２－１２?Ｚｔ与ＩＡＡ浓度对番茄子叶诱导生芽的影响??激素浓度（ｍｇ／Ｌ）?子叶数（个）?出芽数（个）?出芽率（％）????Ｚｔ?ＩＡＡ????￣Ａ?０５?〇７ｌ?９０?７２?８０￣??Ｂ?１?０．１?９０?６８?７５．６??Ｃ?１．５?０．１?９０?２２?２４．４??Ｄ?２?０．１?９０?２８?３１．１???Ｅ?Ｚ５?ＯＡ?９０?５７?６３３???－１４－??
?２农杆菌介导的Ａｆｔ型番茄遗传转化体系的建立???下胚轴作为外植体的分化试验中，接种于培养基上的下胚轴１５?ｄ后有愈伤生成，３０??ｄ后于切口处出芽。如图２－２可以看出，Ａ、Ｂ培养基诱导出芽最多，Ｃ、Ｄ、Ｅ培养基??则诱导出芽较少。如表２－１３统计Ａ培养基出芽率为６７．８％，出芽率最高；其次为Ｂ培??养基，出芽率为６２．２％；?Ｃ培养基出芽率最低，为３６．７％；?Ｄ、Ｅ培养基出芽率有所升??高，分别为４２．２％和４６．７％。因此Ｚｔ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋?ＩＡＡ?０．］?ｍｇ／Ｌ为＃／型番茄下胚轴诱导??生芽最佳激素配比。??子叶与下胚轴相比在２１０．５：１１§几＋１八八０．１〇＾几激素配比下出芽率更高，同时由于??下胚轴在离体时需用刀处理，且需在滤纸上操作，较易污染，且据其他关于番茄遗传转??化研究表明，下胚轴在筛选处理时，假阳性较高，因此本试验后续试验采取子叶作为外??植体。??■＾丄?ｊｉ??图２－２?Ｚｔ与ＩＡＡ浓度诱导番茄下胚轴生芽??表２－１３?Ｚｔ与１ＡＡ浓度对番前下胚轴诱导生芽的影响??激素浓度（ｍｇ／Ｌ）?下胚轴数（个）?出芽数（个）?出芽率（％）￣???Ｚｔ?ＩＡＡ???０５?ＯＡ?９０?６１?６７．８??Ｂ?１?０．１?９０?５６?６２．２??Ｃ?１．５?０．１?９０?３３?３６．７??Ｄ?２?０．１?９０?３８?４２．２???Ｅ?Ｚ５?ＯＡ?９０?４２?４６．７??２．４．１．２卡那霉素浓度对外植体生长状况的影响??卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素，它可以有效筛选转基因番茄幼苗，采用的卡那霉??素浓度过高会
【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导的番茄遗传转化体系优化[J]. 卜璐璐,赵凯,杨荣萍,罗兴会,李清云,杨正安. 江苏农业科学. 2019(09)
[2]番茄花粉管通道遗传转化方法[J]. 金晓霞,李婉婷,于丽杰. 分子植物育种. 2013(04)
[3]花粉管通道法在番茄转基因上的应用[J]. 陈冬朋,于丽杰. 北方园艺. 2010(14)
[4]农杆菌介导的番茄Micro-Tom遗传转化体系的建立[J]. 陈双臣,刘爱荣,王凤华,王菲,周洲. 华北农学报. 2010(02)
[5]Transgenic expression of DwMYB2 impairs iron transport from root to shoot in Arabidopsis thaliana[J]. Yan-Hong Chen~(1,2,3) Xue-Min Wu~5 Hong-Qing Ling~4 Wei-Cai Yang~1 ~1The Key Laboratory of Molecular and Developmental Biology,Institute of Genetics and Developmental Biology,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101 China;~2Graduate University of the Chinese Academy of Sciences,19 Yuquan Road,Beijing 100049,China;~3School of Life Science,Nantong University,Nantong 226007 China; ~4The State Key Laboratory of Plant Cell and Chromosome Engineering,Institute of Genetics and Developmental Biology,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China. Cell Research. 2006(10)
[6]玉米素和IAA对番茄子叶再生的影响[J]. 欧阳波,李汉霞,叶志彪. 植物生理学通讯. 2003(03)
硕士论文
[1]番茄SlHY5基因在低温胁迫中的作用[D]. 张田田.西北农林科技大学 2016
[2]番茄再生体系和转化体系的优化研究[D]. 王婷婷.山西农业大学 2013
[3]Miro-Tom番茄高效遗传转化体系建立及转INH基因植株的获得[D]. 郭旻.沈阳农业大学 2012
本文编号：3359880
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3359880.html
教材专著
