嗜热酸性普鲁兰水解酶Ⅲ的高效分泌表达及其酶学性质

发布时间：2021-08-24 12:55

　　本文探索了嗜热酸性普鲁兰水解酶ⅢTk-PUL在枯草芽孢杆菌表达系统中的高效分泌表达条件,并对重组Tk-PUL的酶学性质进行了初步研究。通过构建Tk-PUL分泌表达信号肽筛选库,并结合高通量筛选方法,确定引导Tk-PUL在枯草芽孢杆菌中高效分泌表达的信号肽。结果表明,在信号肽AmyE的引导下,重组Tk-PUL在枯草芽孢杆菌表达系统中高效分泌表达。Tk-PUL属于单结构域双功能酶,同时具有α-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性。重组Tk-PUL的α-淀粉酶活性的最适反应pH为4.5,最适反应温度为100℃,对应的绝对酶活为54.08 U/mg,于100℃的半衰期约为2 h。重组Tk-PUL的普鲁兰酶活性的最适反应pH为4.5,最适反应温度为100℃,对应的绝对酶活为110.39 U/mg,于100℃的半衰期约为2 h。本研究为Tk-PUL在淀粉酶法制糖工业中的应用奠定了基础。 

【文章来源】：食品工业科技. 2020,41(03)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 分子克隆技术和表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析
        1.2.2 Tk-PUL分泌表达信号肽筛选库的构建
        1.2.3 Tk-PUL分泌表达信号肽筛选库的高通量培养
        1.2.4 α-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性的高通量检测
        1.2.5 Tk-PUL分泌表达信号肽的鉴定
        1.2.6 Tk-PUL在枯草芽孢杆菌表达系统中的分泌表达和纯化
        1.2.7 Tk-PUL的酶学性质分析
            1.2.7.1 α-淀粉酶活性测定和普鲁兰酶活性测定
            1.2.7.2 酶的最适反应pH测定
            1.2.7.3 酶的最适反应温度测定
            1.2.7.4 酶的热稳定性测定
            1.2.7.5 酶的动力学常数测定
    1.3 数据处理
2 结果与分析
    2.1 Tk-PUL分泌表达信号肽筛选库的高通量筛选
    2.2 Tk-PUL分泌表达信号肽的鉴定
    2.3 重组Tk-PUL的分泌表达与纯化
    2.4 重组Tk-PUL的酶学性质研究
        2.4.1 pH对重组Tk-PUL相对酶活的影响
        2.4.2 温度对重组Tk-PUL的α-淀粉酶比活力和普鲁兰酶比活力的影响
        2.4.3 重组Tk-PUL的热稳定性
        2.4.4 重组Tk-PUL的动力学参数
3 结论



本文编号：3360030