脂肪基质细胞源性神经元的突触内吞功能研究
发布时间：2021-09-03 17:17
目的研究脂肪基质细胞（Adipose-derived stromal cells,ADSC）源性神经元是否具有正常神经元的突触内吞功能。方法1应用针吸法获取成人皮下脂肪组织,提取ADSC培养及传代。2选取第三代ADSC,采用β巯基乙醇（β-mercaptoethanol,β-ME）诱导分化为神经元,将细胞分为ADSC组、1h、3h、5h、8h组。3扫描电子显微镜（Scanning electron microscope,SEM）下观察分化各组细胞的三维形态学特征。4 ADSC源性神经元特异性标志物检测:免疫细胞化学法及Western-blotting法检测各组细胞神经元的特异性烯醇化酶（Neuron specific enolase,NSE）及微管相关蛋-2（Microtubule associated protein 2,MAP-2）的表达情况。5 ADSC源性神经元突触内吞功能核心标志物检测:免疫细胞化学法、免疫荧光双标法以及Western-blotting法定性、定位和定量检测各组细胞中神经元内吞作用核心蛋白衔接蛋白-2（AP-2）、网格蛋白（Clathrin）、吞蛋白（Endo...
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ADSC诱导后向神经元分化过程中细胞形态学的变化特征
华北理工大学硕士学位论文-20-表6ADSC诱导后向神经元分化过程中NSE和MAP-2细胞阳性表达率结果（%）组别nNSEMAP-2ADSC组150Δ0Δ1h组1544.73±6.12Δ42.96±6.60Δ3h组1573.41±2.89Δ73.61±3.97Δ5h组1588.87±2.7687.08±5.158h组1583.78±4.74Δ81.24±4.83ΔF值1332.584895.378P值<0.001<0.001注：n代表取15个样本；Δ表示两两比较时各组与5h组与相比P<0.05。2）ADSC诱导分化为神经元过程中NSE和MAP-2的表达水平检测结果ADSC组未见NSE和MAP-2的表达，诱导1h、3h、5h、8h组均见NSE和MAP-2表达，且各组的表达量均有明显差异（F=524.334、F=425.090,均P<0.001）。在1h组时的NSE和MAP-2的表达水平明显低于3h组（均P<0.05），3h组明显低于5h组（均P<0.001），5h组明显高于8h组（均P<0.05）。（见图6，表7）A—NSE蛋白表达水平；B—MAP-2蛋白表达水平。图6Western-blotting法检测ADSC诱导后向神经元分化过程中NSE和MAP-2表达水平表7ADSC诱导后向神经元分化过程中NSE和MAP-2表达水平的检测结果（%）组别nNSEMAP-2ADSC组80Δ0Δ1h组80.24±0.03Δ0.28±0.04Δ3h组80.28±0.02Δ0.39±0.03Δsxsx
华北理工大学硕士学位论文-22-A1-A5、B1-B5、C1-C5、D1-D5、E1-E5—ADSC组及诱导各组AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70表达情况；A1-E1—ADSC组无阳性表达；A2-A5、B2-B5、C2-C5、E2-E5—诱导1h、3h、5h、8h时均见位于胞体及突起部位的各蛋白阳性表达。（LM,×200）图7免疫细胞化学法检测ADSC诱导后向神经元分化过程中AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70的表达情况2）ADSC诱导分化为神经元过程中NSE与AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70的共同表达特征检测结果ADSC组未见NSE与AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70共阳性表达细胞。诱导1h、3h、5h、8h组均见NSE与AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70共阳性表达细胞。在各时间组的细胞共阳性表达率均有明显差异（F=2029.768、F=2663.668、F=2430.583、F=1430.623、F=1357.427,均P<0.001），其中1h组细胞共
【参考文献】：
期刊论文
[1]Impacts of increased α-synuclein on clathrin-mediated endocytosis at synapses:implications for neurodegenerative diseases[J]. Audrey T.Medeiros,Luigi Bubacco,Jennifer R.Morgan. Neural Regeneration Research. 2018(04)
[2]CdSe量子点的合成、功能化及生物应用[J]. 邓文清,代蕊,江雪,罗虹,黄科,熊小莉. 中国测试. 2017(11)
[3]Dynamin在突触囊泡内吞过程中的作用[J]. 李洋,唐小林,袁伟. 中国医学文摘(耳鼻咽喉科学). 2017(06)
[4]RNA干扰endophilin A2抑制大鼠海马神经元突触囊泡内吞[J]. 张吉凤,尹义臣,杨万勇,谭明会,郭国庆. 中国病理生理杂志. 2016(05)
[5]突触囊泡循环研究进展[J]. 李叶菲,张晓醒,段树民. 生理学报. 2015(06)
[6]常用神经元标记物的研究进展[J]. 王正晖,单娜娜,王鹏,李玉光,王永阔. 武警后勤学院学报(医学版). 2015(12)
[7]可兴奋细胞胞吐胞吞的耦联机制[J]. 刘彦梅,郑晓璐,袁天一,陈良怡. 中国细胞生物学学报. 2015(12)
[8]AP-2蛋白调控网格蛋白介导突触囊泡胞吞的研究进展[J]. 顾翔,袁伟. 中华耳科学杂志. 2015(02)
[9]突触囊泡内吞的分子机制[J]. 张妮,王世伟,苟兴春. 海南医学. 2014(16)
[10]Autophagy and apoptosis during adult adipose-derived stromal cells differentiation into neuron-like cells in vitro[J]. Yanhui Lu1,Xiaodong Yuan1,Ya Ou1,Yanan Cai1,Shujuan Wang1,Qiaoyu Sun1,Wenli Zhang2 1Department of Neurology,Kailuan General Hospital,Hebei Union University,Tangshan 063000,Hebei Province,China 2Hebei Union University,Tangshan 063000,Hebei Province,China. Neural Regeneration Research. 2012(16)
硕士论文
[1]Dynamin 1的磷酸化状态与神经元兴奋性的相关性研究[D]. 周继秀.重庆医科大学 2017
[2]CaMKⅡ、SynCAM1与脂肪基质细胞源性神经元样细胞突触样结构可塑性的关系[D]. 朱旭红.华北理工大学 2017
[3]脂肪基质细胞源性神经元突触释放功能的相关分子结构研究[D]. 孟燕.华北理工大学 2018
[4]影响神经干细胞体外分化后突触形态与功能的相关因素研究[D]. 吕楠.重庆医科大学 2009
本文编号：3381529
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ADSC诱导后向神经元分化过程中细胞形态学的变化特征
华北理工大学硕士学位论文-20-表6ADSC诱导后向神经元分化过程中NSE和MAP-2细胞阳性表达率结果（%）组别nNSEMAP-2ADSC组150Δ0Δ1h组1544.73±6.12Δ42.96±6.60Δ3h组1573.41±2.89Δ73.61±3.97Δ5h组1588.87±2.7687.08±5.158h组1583.78±4.74Δ81.24±4.83ΔF值1332.584895.378P值<0.001<0.001注：n代表取15个样本；Δ表示两两比较时各组与5h组与相比P<0.05。2）ADSC诱导分化为神经元过程中NSE和MAP-2的表达水平检测结果ADSC组未见NSE和MAP-2的表达，诱导1h、3h、5h、8h组均见NSE和MAP-2表达，且各组的表达量均有明显差异（F=524.334、F=425.090,均P<0.001）。在1h组时的NSE和MAP-2的表达水平明显低于3h组（均P<0.05），3h组明显低于5h组（均P<0.001），5h组明显高于8h组（均P<0.05）。（见图6，表7）A—NSE蛋白表达水平；B—MAP-2蛋白表达水平。图6Western-blotting法检测ADSC诱导后向神经元分化过程中NSE和MAP-2表达水平表7ADSC诱导后向神经元分化过程中NSE和MAP-2表达水平的检测结果（%）组别nNSEMAP-2ADSC组80Δ0Δ1h组80.24±0.03Δ0.28±0.04Δ3h组80.28±0.02Δ0.39±0.03Δsxsx
华北理工大学硕士学位论文-22-A1-A5、B1-B5、C1-C5、D1-D5、E1-E5—ADSC组及诱导各组AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70表达情况；A1-E1—ADSC组无阳性表达；A2-A5、B2-B5、C2-C5、E2-E5—诱导1h、3h、5h、8h时均见位于胞体及突起部位的各蛋白阳性表达。（LM,×200）图7免疫细胞化学法检测ADSC诱导后向神经元分化过程中AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70的表达情况2）ADSC诱导分化为神经元过程中NSE与AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70的共同表达特征检测结果ADSC组未见NSE与AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70共阳性表达细胞。诱导1h、3h、5h、8h组均见NSE与AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70共阳性表达细胞。在各时间组的细胞共阳性表达率均有明显差异（F=2029.768、F=2663.668、F=2430.583、F=1430.623、F=1357.427,均P<0.001），其中1h组细胞共
【参考文献】：
期刊论文
[1]Impacts of increased α-synuclein on clathrin-mediated endocytosis at synapses:implications for neurodegenerative diseases[J]. Audrey T.Medeiros,Luigi Bubacco,Jennifer R.Morgan. Neural Regeneration Research. 2018(04)
[2]CdSe量子点的合成、功能化及生物应用[J]. 邓文清,代蕊,江雪,罗虹,黄科,熊小莉. 中国测试. 2017(11)
[3]Dynamin在突触囊泡内吞过程中的作用[J]. 李洋,唐小林,袁伟. 中国医学文摘(耳鼻咽喉科学). 2017(06)
[4]RNA干扰endophilin A2抑制大鼠海马神经元突触囊泡内吞[J]. 张吉凤,尹义臣,杨万勇,谭明会,郭国庆. 中国病理生理杂志. 2016(05)
[5]突触囊泡循环研究进展[J]. 李叶菲,张晓醒,段树民. 生理学报. 2015(06)
[6]常用神经元标记物的研究进展[J]. 王正晖,单娜娜,王鹏,李玉光,王永阔. 武警后勤学院学报(医学版). 2015(12)
[7]可兴奋细胞胞吐胞吞的耦联机制[J]. 刘彦梅,郑晓璐,袁天一,陈良怡. 中国细胞生物学学报. 2015(12)
[8]AP-2蛋白调控网格蛋白介导突触囊泡胞吞的研究进展[J]. 顾翔,袁伟. 中华耳科学杂志. 2015(02)
[9]突触囊泡内吞的分子机制[J]. 张妮,王世伟,苟兴春. 海南医学. 2014(16)
[10]Autophagy and apoptosis during adult adipose-derived stromal cells differentiation into neuron-like cells in vitro[J]. Yanhui Lu1,Xiaodong Yuan1,Ya Ou1,Yanan Cai1,Shujuan Wang1,Qiaoyu Sun1,Wenli Zhang2 1Department of Neurology,Kailuan General Hospital,Hebei Union University,Tangshan 063000,Hebei Province,China 2Hebei Union University,Tangshan 063000,Hebei Province,China. Neural Regeneration Research. 2012(16)
硕士论文
[1]Dynamin 1的磷酸化状态与神经元兴奋性的相关性研究[D]. 周继秀.重庆医科大学 2017
[2]CaMKⅡ、SynCAM1与脂肪基质细胞源性神经元样细胞突触样结构可塑性的关系[D]. 朱旭红.华北理工大学 2017
[3]脂肪基质细胞源性神经元突触释放功能的相关分子结构研究[D]. 孟燕.华北理工大学 2018
[4]影响神经干细胞体外分化后突触形态与功能的相关因素研究[D]. 吕楠.重庆医科大学 2009
本文编号：3381529
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