白蚁和共生细菌由来木质纤维素降解酶基因的异源表达
发布时间：2021-09-09 09:19
木质纤维素是地球上最丰富的可再生生物质。天然的木质纤维素材料含有纤维素、半纤维素和木质素等,纤维素在木质纤维素中为最简单的成分,半纤维素和木质素包裹在纤维素的外面,形成了一种天然屏障,这层天然屏障在保护植物的同时,使得人工进行生物降解转化的效率很低,无法适应大规模工业化的要求。自然界中存在一些降解木质纤维素材料的生物系统,白蚁也为一种,白蚁和共生细菌由来木质纤维素酶具有较高的酶活和良好的耐碱性。本文以白蚁和共生细菌为对象,探究了几种木质纤维素酶的协同作用,同时对实验室前期分离得到的厌氧菌Dysgonomonas macrotermitis开展了相关研究,该属为黄翅大白蚁（Macrotermes barneyi）肠道第二优势菌群,具有纤维素活性,为了得到酶学性质较好的木质纤维素酶,进而加快其在工业领域的应用,我们进行了如下研究:M barneyi后肠D.macrotermiD.木聚糖酶的异源表达。通过基因组测序、blast比对分析和分子生物学方法,找到5个木聚糖酶基因,并在E.coli JM109中克隆表达,发现只有DysxynB（orf-00078）和DysxynE（orf-03642...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]利用游离型表达质粒强化毕赤酵母表达木聚糖酶[J]. 潘阳,吴丹,吴敬. 生物工程学报. 2018(05)
[2]β-甘露聚糖酶和木聚糖酶基因在大肠杆菌中共表达[J]. 高海有,刘正初,段盛文,成莉凤,石岩,冯湘沅,郑霞,郑科,宋志姣. 微生物学通报. 2012(03)
[3]台湾家白蚁内切葡聚糖酶活性中心氨基酸的饱和突变[J]. 林丽华,秦国梅,韦宇拓,杜丽琴,庞宗文,黄日波. 生物工程学报. 2009(06)
[4]棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae木聚糖酶基因的克隆、表达和酶学性质分析[J]. 张桂敏,饶犇,叶戋,马立新,张先恩. 微生物学报. 2008(06)
[5]酿酒酵母gpd1和hor2基因在大肠杆菌中的共表达[J]. 杜丽琴,韦宇拓,陈发忠,罗兆飞,黄日波. 生物工程学报. 2005(03)
[6]利用不相容质粒共转化大肠杆菌对Cre重组酶体内重组活性的可视检测[J]. 庞永奇,贾洪革,方荣祥,郭蔼光,陈晓英. 微生物学报. 2005(01)
[7]毕赤酵母表达外源基因研究进展[J]. 王勇. 微生物学免疫学进展. 2004(01)
[8]人血管抑素在毕氏酵母中的表达及其活性测定[J]. 辛利,张励,徐韧,张倩,叶勤,李载平,甘人宝. 生物化学与生物物理学报. 2001(03)
硕士论文
[1]纤维素酶和木聚糖酶在酿酒酵母中的共表达及应用研究[D]. 夏武成.湖北大学 2018
[2]黄翅大白蚁及其共生菌由来β-葡萄糖苷酶的研究[D]. 姜淑喆.山东大学 2018
[3]黄翅大白蚁肠道微生物多样性及几丁质降解微生物的分离与鉴定[D]. 孙新新.山东大学 2017
[4]白蚁及其肠道微生物来源木质纤维素酶基因的克隆与表达[D]. 宁娜.山东大学 2017
[5]天然纤维素降解过程中的多酶协同作用研究[D]. 高媛.湖北大学 2016
[6]黄翅大白蚁后肠细菌来源木聚糖酶的纯化与基因克隆以及培菌白蚁菌圃微生物多样性研究[D]. 石小玉.山东大学 2015
[7]β-葡萄糖苷酶基因和内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的共表达及发酵条件研究[D]. 万玉军.四川农业大学 2013
[8]细菌纤维素外切酶基因的筛选及耐热纤维素酶基因在枯草杆菌系统里的表达[D]. 刘建明.华东理工大学 2011
[9]热稳定性细菌葡聚糖内切酶的克隆与表征[D]. 邱立欢.华东理工大学 2011
本文编号：3391838
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１?ｐＱＥ３０质粒图谱??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＱＥ３０?ｖｅｃｔｏｒ．??
?９３％?Ｄ．?ｇａｄｅｉ??分别选取了与两个木聚糖酶同源性较高（大于７０％）的２０个基因片段，通??过邻位法作出进化树（图２．２）。ＤｙｓｘｙｎＢ与Ｄ．ｇａｃ／ｄ中注释的预测基因有９８％??的同源性，该菌株分离于人体的临床标本。与ＤｙｓｘｙｎＥ在一个进化分支上的为??－－株命名为Ｂａｒｂ４的拟杆菌来源的木聚糖酶，其同源性较低，为１９％。??９９?Ｖｉ！？?０１０６６３０２３．１?ＭｚｒｂｔＨａｂｉ／ｉａ?＾ａｂｎｏｎｋｏｌｏｒ???—?ＷＴ?０１６７７８７０４．１?Ａｎａｅｒｏｐｈａｇａ?ｉｈｅｒｍｏｈａｂｐｋｉｌａ????ＷＴ?１０１４８６Ｓ２２．１?Ｄｙｚｇｏｎａｍｏｎａｄａｃｔａｅ?ｂａｃｔｅｒｉｕｍ??４３??１９＿?＾ＷＰ?０６２１７５２０９．１?Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ?ｍａｃｒｏｔｅｒｍｔｉｉｓ??＇ＡＴ?０６６２４１０４１．１?Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ?ｂａｃｉｅｒｉｕｍＢｘＭ??＾?ＯＪＶ８９９１３．１?Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｉａ?ｂａｃｔｅｒｉｕｍ?４４－１０??ＯＦＸ５２８５６．１?Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔａｓ?ｂａｃｔａｒｉｗｎ?ＧＷＣ２?４６?３５０??１００?ＷＰ?０８７３２２４４０．１?Ｂａｃｉｔｒｏｉｄｔｓ?ｘｙｌａｎｉｓｏｈｅｎｓ???—?４８?ＷＰ?００Ｓ０２６０３Ｓ．１?Ｂａｃｉｅｒｏｋｋｓ?ｘｙｌｅｍｉｓｏＳ＇ｅ／ａ??ＣＢＨ３２８２３?１?ｄａｃｔｅｒｏｋｋｓ?ｘｙｌｃｍｉｓｏ＼ｅｍ?ＸＢ１Ａ??抑?９２?ＷＰ?１０１６８９４９８．１?Ｄｙｚｇｏｎｏｍｏｎａｓ?ｓｐ．?Ｍａｒｓｅｆｌｌｅ－Ｐ４３５６????９９?■?ＷＰ?０７０８０
?山东大学硕士学位论文???２．４．２在大肠杆菌中表达Ｄｙｓｘｙｎｓ??２．４．２．１表达载体的构建??使用基因组提取试剂盒成功得到乃．ｗａｃｒｏ／ｅｒｗ／ｔｏ?ＪＣＭ１９３７５Ｔ的基因组，使??用２．３．３步骤中的方法进行ＰＣＲ扩增，得到５个不同大小的Ｄｙｓｘｙｎｓ片段（图??２．３Ｂ?１－５：９７８、１１１６、９９０、９８７?和?７９５?ｂｐ），将片段构建于?ｐＱＥ３０?表达载体，分??别获得５个重组质粒，对其命名为ｐＱＥ３０－ＤｙｓｘｙｎＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ。??Ａ?Ｂ?ｃ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用游离型表达质粒强化毕赤酵母表达木聚糖酶[J]. 潘阳,吴丹,吴敬. 生物工程学报. 2018(05)
[2]β-甘露聚糖酶和木聚糖酶基因在大肠杆菌中共表达[J]. 高海有,刘正初,段盛文,成莉凤,石岩,冯湘沅,郑霞,郑科,宋志姣. 微生物学通报. 2012(03)
[3]台湾家白蚁内切葡聚糖酶活性中心氨基酸的饱和突变[J]. 林丽华,秦国梅,韦宇拓,杜丽琴,庞宗文,黄日波. 生物工程学报. 2009(06)
[4]棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae木聚糖酶基因的克隆、表达和酶学性质分析[J]. 张桂敏,饶犇,叶戋,马立新,张先恩. 微生物学报. 2008(06)
[5]酿酒酵母gpd1和hor2基因在大肠杆菌中的共表达[J]. 杜丽琴,韦宇拓,陈发忠,罗兆飞,黄日波. 生物工程学报. 2005(03)
[6]利用不相容质粒共转化大肠杆菌对Cre重组酶体内重组活性的可视检测[J]. 庞永奇,贾洪革,方荣祥,郭蔼光,陈晓英. 微生物学报. 2005(01)
[7]毕赤酵母表达外源基因研究进展[J]. 王勇. 微生物学免疫学进展. 2004(01)
[8]人血管抑素在毕氏酵母中的表达及其活性测定[J]. 辛利,张励,徐韧,张倩,叶勤,李载平,甘人宝. 生物化学与生物物理学报. 2001(03)
硕士论文
[1]纤维素酶和木聚糖酶在酿酒酵母中的共表达及应用研究[D]. 夏武成.湖北大学 2018
[2]黄翅大白蚁及其共生菌由来β-葡萄糖苷酶的研究[D]. 姜淑喆.山东大学 2018
[3]黄翅大白蚁肠道微生物多样性及几丁质降解微生物的分离与鉴定[D]. 孙新新.山东大学 2017
[4]白蚁及其肠道微生物来源木质纤维素酶基因的克隆与表达[D]. 宁娜.山东大学 2017
[5]天然纤维素降解过程中的多酶协同作用研究[D]. 高媛.湖北大学 2016
[6]黄翅大白蚁后肠细菌来源木聚糖酶的纯化与基因克隆以及培菌白蚁菌圃微生物多样性研究[D]. 石小玉.山东大学 2015
[7]β-葡萄糖苷酶基因和内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的共表达及发酵条件研究[D]. 万玉军.四川农业大学 2013
[8]细菌纤维素外切酶基因的筛选及耐热纤维素酶基因在枯草杆菌系统里的表达[D]. 刘建明.华东理工大学 2011
[9]热稳定性细菌葡聚糖内切酶的克隆与表征[D]. 邱立欢.华东理工大学 2011
本文编号：3391838
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