一种基于磁珠的血清miRNA提取体系的研究

发布时间：2021-09-24 04:49

　　目的:miRNA分子被广泛用于各种疾病的研究,是临床上诊断、预后的重要生物标志,但因其分子较小,且在组织中的表达量水平很低,传统的核酸提取方法无法对其进行高效提取,因此本文拟构建一套用于miRNA高效提取的磁珠法提取体系。方法:在传统的核酸提取方法的基础上,本研究主要选择LGC、PuriMag和WD三个品牌不同的磁珠进行miRNA提取体系的建立,主要探讨了磁珠用量和裂解液pH对体系提取miRNA的影响,并用实时荧光定量PCR进行验证。结果:WD磁珠（25 mg/mL）在磁珠使用量为30μL、裂解液pH=8.0时,提取效果最好。结论:研究建立了一套以WD磁珠为核心miRNA提取体系,为miRNA提取方法的进一步优化奠定了基础。 

【文章来源】：中国计量大学学报. 2020,31(04)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

三种磁珠不同用量条件下的Ct值

当磁珠用量均为30 μL,在同样的检测样本量条件下,在不同裂解液pH条件下,3种不同磁珠的提取效率也表现出一定的差异(如图2)。裂解液pH值太大或太小都会严重影响磁珠的提取性能,pH值在7.0～9.0之间是3种磁珠提取体系较适宜的酸碱工作范围,当pH值为8.0时,三种磁珠的qPCR的Ct值皆最小,说明此时对miRNA的提取效率最高,LGC和WD磁珠的提取效率相比PuriMag磁珠略高,但没有显著性差异。3)3种磁珠提取体系性能的比较

在3种磁珠最适的磁珠用量(30 μL)、pH(8.0)条件下提取相同量的样本,多次重复,并与对照组Promega试剂盒提取结果进行比较,如图3所示,LGC、PuriMag、WD三种磁珠体系以及对照组Promega平均Ct值分别为27.83、28.25、27.5和27.15。利用SPSS显著性差异分析(t检验),LGC、PuriMag与Promega有显著性差异(t检验的P值分别为0.037、0.028,P≤0.05),表明LGC、PuriMag与Promega相比具有明显差距。而WD磁珠提取体系提取miRNA的效率与对照组Promega试剂盒组相比,二者没有显著性差异,提取性能相当。这说明WD磁珠提取体系提取miRNA的效率在3种磁珠提取体系中最高,可以替代Promega试剂盒提取试剂盒。3 讨 论

【参考文献】：
期刊论文
[1]From blood to breath: New horizons for esophageal cancer biomarkers[J]. Roger Yazbeck,Simone E Jaenisch,David I Watson.  World Journal of Gastroenterology. 2016(46)



本文编号：3407128