小鼠下丘脑和海马组织神经干细胞的蛋白质组学分析

发布时间：2021-09-27 23:28

　　目的:采用蛋白质组学法探讨C57BL/6J小鼠下丘脑和海马组织中神经干细胞（NSCs）中蛋白质表达差异,阐明不同来源（区域） NSCs中蛋白表达谱不同的原因,为下丘脑和海马组织NSCs的基础研究和移植治疗提供参考。方法:提取出生24 h内C57BL/6J小鼠原代下丘脑和海马组织NSCs,经传代进行扩增和纯化。观察细胞形态表现,免疫荧光法检测NSCs中Nestin和Sox2的表达,采用串联质谱标签（TMT）蛋白质组学法分析下丘脑和海马组织NSCs中的差异表达蛋白质,对得到的差异蛋白质进行生物信息学分析。结果:形态表现检测,下丘脑和海马组织NSCs均表现出不透明和折光率高的典型神经球形态。免疫荧光检测,下丘脑和海马组织NSCs中Nestin和Sox2阳性表达率随培养代数增加而升高,在第4代达到98%以上,但下丘脑和海马组织NSCs比较差异无统计学意义（P>0.05）。蛋白质组学分析,与海马组织比较,下丘脑组织NSCs中有6种蛋白表达水平明显升高（P<0.05和P<0.01）,4种蛋白表达水平明显降低（P<0.05和P<0.01）。基因本体（GO）分析,差异蛋白... 

【文章来源】：吉林大学学报(医学版). 2020,46(06)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

小鼠来源的P0代下丘脑和海马组织中NSCs形形态态表表现现（Bar=200μm)

P2～P4代下丘脑和海马组织中NSCs中Nestin和Sox2的阳性表达率随着代数的增加而增加，但下丘脑和海马组织NSCs中Nestin和Sox2的表达阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）。当传代培养到P2代，下丘脑组织NSCs中Sox2阳性表达率为（76.87±5.65)%(Sox2+/DPAI），海马组织NSCs中Sox2阳性表达率为（80.75±10.76）%；下丘脑组织NSCs中Nestin阳性表达率为（74.66±9.40)%(Nestin+/DPAI），海马组织NSCs中Nestin阳性表达率为（80.72±12.71）%，见图3。当传代培养到P4代，下丘脑组织NSCs中Sox2阳性表达率为（98.35±2.58）%，海马组织NSCs中Sox2阳性表达率为（99.48±1.06）%；下丘脑组织NSCs中Nestin阳性表达率为（98.73±1.81）%，海马组织NSCs中Nestin阳性表达率为（99.48±1.06）%，见图4（插页三）和图5，即传代培养可以提升下丘脑和海马组织NSCs的纯化率，因此，本课题组选择具有较高纯度的P4代下丘脑和海马组织的NSCs用于后续研究，较高的NSCs比例为蛋白质组学的分析提供了保证。2.4 下丘脑和海马组织中NSCs质谱分析

通过TMT标记联合LC-MS/MS分析共匹配到131 016个质谱图，鉴定到42 456个肽段，38 195个特异性肽段和5 593种蛋白，对鉴定到的蛋白质进行统计学分析显示：在下丘脑和海马组织NSCs中最终得到10种差异蛋白，其中相对于海马NSCs上调的蛋白有6种，相对于海马NSCs下调的蛋白有4种。见表1。2.5 差异蛋白质的GO和KEEG通路分析


本文编号：3410814