蛋白质免疫印迹技术在本科实验教学中的应用

发布时间：2021-09-30 14:52

　　蛋白质免疫印迹技术是生命科学研究领域的常用技术手段,尝试将其改造成适于本科教学实践的实验内容,即在基础性分子生物学实验的基础上开设"免疫印迹法检测目的基因在原核细胞中的表达"这一综合性实验。根据学生的理论和操作水平以及本科实验教学特点,对实验内容和实验方法进行了优化,并采取研讨式分组教学模式,使学生能够深入、全面、系统地理解和掌握蛋白质免疫印迹技术,提高了实验教学质量,并有助于培养学生的科学思维、科学素养以及综合实践能力。 

【文章来源】：实验室研究与探索. 2020,39(02)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

软件合成结果

从图2结果可见，A和B泳道上出现GST相应大小的清晰条带，C和D泳道上出现GST-GAPDH相应大小的清晰条带，且诱导组(B和D)分别较对照组(A和C)中目的蛋白表达量有明显增加，符合实验预期。但结果中尚存在2个问题:(1)出现非特异性条带;(2)没有检测内参(这两部分内容会在后面的5.4和6.3.4中具体讨论)。图2 软件合成结果

在目的蛋白的诱导表达和PAGE分析实验中，分别对转化有pGEX-4T-2空载体和pGEX-4T-2/GAPDH重组质粒的菌体进行IPTG诱导，全菌样品利用SDS-PAGE结合考马斯亮蓝染色分析，结果如图3所示。从图3可见，在B泳道中31kD稍下的位置，出现了相对A泳道中同样位置表达增加的蛋白条带，理论上应为GST蛋白;在D泳道中66.2kD稍下的位置，出现了相对C泳道中同样位置表达增加的蛋白条带，理论上应为GST-GAPDH蛋白。但该方法只是根据蛋白分子量大小进行判断，并不具有特异性，即使表达量增加的蛋白大小符合预期，也无法完全确定该蛋白就是目的蛋白，这就引发了学生对结果的质疑。

【参考文献】：
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本文编号：3416093