过表达GATA-4骨髓间充质干细胞分泌的外泌体促进骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

发布时间：2021-10-10 03:51

　　背景:前期证明,过表达心脏基因转录因子GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞分泌的外泌体(BMSCs^GATA-4-exosome)可以促进BMSCs向心肌样细胞分化,提示其可以修复心肌梗死,另外还发现BMSCs^GATA-4-exosome中及心肌梗死局部心肌组织中有mi RNA-673-5p明显高表达且功能涉及细胞分化,可能是BMSCs^GATA-4-exosome修复心肌梗死的关键分子。目的:探讨BMSCs^GATA-4-exosome促进BMSCs向心肌样细胞分化的分子调控网络。方法:在小鼠BMSCs培养体系内加入miRNA-673-5p模拟物（mi R-673-5p-mimic）作为实验组(BMSCs^{miR-673-5p-mimic}),将BMSCs^GATA-4组、BMSCs^{GATA-4-空载体}组、BMSCs组、BMSCs^{miR-673-5p-inhibitor}组作为混杂因素对照组,提取各组分泌的外泌体与BMSCs直接... 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2020,24(19)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
文章快速阅读：
文题释义：
缩略语：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 设计
    1.2 时间及地点
    1.3 材料
        1.3.1 实验试剂
        1.3.2 实验动物
    1.4 实验方法
        1.4.1 小鼠BMSCs的分离、培养及鉴定
        1.4.2 慢病毒载体及基因开启技术构建过表达GATA-4的BMSCs
        1.4.3 BMSCsmiR-673-5p-mimic和BMSCsmiR-673-5p-inhibitor构建
        1.4.4 外泌体的提取
        1.4.5 细胞的分组及处理
        1.4.6 免疫荧光技术定性评估各组共培养BMSCs表达
        1.4.7 RT-PCR方法检测各组共培养BMSCs内α-actin、Cx43、Desmin、cTnT的表达
        1.4.8 根据基因库推测miRNA-673-5p的靶基因
        1.4.9 Western blot检测TSC-1、ERK1/2、Mef2c的蛋白表达
    1.5 主要观察指标
    1.6 统计学分析
2 结果Results
    2.1 小鼠BMSCs中CD29、CD44及SCA-1的表达
    2.2 慢病毒转染48h后小鼠BMSCs中GATA-4的表达
    2.3 采用免疫荧光技术定性评估BMSCs表达α-actin、Cx43、Desmin、cTnT情况
    2.4 RT-PCR检测BMSCs中心肌特异性抗原cTnT、α-actin、Cx43、Desmin及TSC-1、ERK1/2、Mef2c蛋白表达
        2.4.1 BMSCs内心肌特异性抗原cTnT、α-actin、Cx43、Desmin表达
        2.4.2 BMSCs内TSC-1、ERK1/2、Mef2c表达水平
3 讨论Discussion


【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的初步探讨[J]. 贺继刚,韩金秀,李贝贝,李宏远,严丹.  临床心血管病杂志. 2018(02)
[2]过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞修复心肌损伤的效果研究[J]. 贺继刚,韩金秀,李贝贝,李宏远,李洪荣,严丹.  中国全科医学. 2018(02)
[3]过表达GATA-4骨髓间充质干细胞通过外排体修复心肌损伤的机制[J]. 贺继刚,韩金秀,李贝贝,李宏远,李洪荣,撒亚莲,严丹.  临床心血管病杂志. 2017(12)
[4]采用高速离心及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体比较及鉴定[J]. 韩金秀,李宏远,撒亚莲,严丹,贺继刚.  安徽医科大学学报. 2017(04)
[5]外排体的研究概况[J]. 贺继刚,王平,李洪荣.  医学综述. 2015(18)



本文编号：3427589