果蝇miR-210调控脂质代谢以及维持感光神经元结构与功能的分子机制研究
发布时间：2021-10-22 15:49
Micro RNAs（miRNAs）是一类生物体内丰富存在的长约22个核苷酸的非编码小RNA,并通过转录和转录后调控抑制基因的表达。近年来,多项研究表明miRNAs在维持神经系统结构与功能方面发挥重要作用。miRNAs调控失衡与多种神经退行性疾病密切相关。发现新的神经系统特异性miRNAs及鉴定其在各类神经元中的作用机制对于理解基本的神经发育过程以及神经元退化机制至关重要。miR-210属于一个在不同物种中高度保守miRNAs家族。早期研究发现miR-210在低氧诱导情况下高表达,并调控多种生物学过程。多项研究也表明miR-210在包括乳腺癌,骨肉瘤和肺癌等多种癌症组织中高表达并在癌症的发生发展起到重要作用。尽管如此,miR-210的生理学功能并不完全清楚。本文研究发现miR-210能够调节脂质代谢并维持果蝇眼睛的结构与功能,阻止感光神经元（photoreceptor）退化。miR-210在包括眼睛在内的多种果蝇感觉器官中特异性表达。利用CRISPR-Cas9技术构建的miR-210缺失突变体—miR-210Δ130,其成虫眼睛结构存在缺陷,感光神经元R1-R7提...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：140 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 miRNAs研究进展
1.1.1 miRNAs的研究历史
1.1.2 miRNAs的生物合成机制
1.1.3 miRNAs的作用机制
1.1.4 鉴定miRNAs的靶标基因
1.1.5 miRNAs的功能
1.1.5.1 miRNAs与心血管疾病(心脏重塑)
1.1.5.2 miRNAs与炎症反应
1.1.5.3 miRNAs与血管生成
1.1.5.4 miRNAs与代谢
1.1.5.5 miRNAs与癌症
1.1.5.6 miRNAs与神经系统
1.1.5.7 miRNAs与病毒
1.1.6 miRNAs与感觉神经系统
1.2 miR-210研究进展
1.2.1 miR-210 与低氧的联系:miR-210与HIF形成正反馈调节机制
1.2.2 miR-210 与疾病:miR-210 可以作为肿瘤检测的标记物
1.2.3 miR-210与感觉神经系统
1.2.4 果蝇miR-210研究进展
1.3 模式生物:果蝇
1.3.1 果蝇作为模式生物的优势
1.3.2 模式生物果蝇研究工具
1.3.3 研究模型:果蝇成虫眼睛
1.3.4 脂质代谢对果蝇眼睛功能的影响
1.4 SREBP研究进展
1.5 ACS研究进展
2 实验材料与方法
2.1 果蝇相关实验
2.1.1 果蝇培养方法及实验方法
2.1.2 果蝇基因组DNA粗提取
2.1.3 果蝇基因组DNA精提取
2.1.4 果蝇total RNA提取
2.1.5 果蝇miRNAs提取
2.1.6 果蝇蛋白质提取
2.1.7 果蝇显微注射
2.1.8 果蝇幼虫组织解剖及免疫荧光染色
2.1.9 果蝇成虫眼睛组织解及免疫荧光染色
2.1.10 果蝇组织透射电镜样品制备方法
2.2 分子生化实验
2.2.1 CRISPR-Cas9
2.2.2 脂质组学分析(Lipid-MS)
2.2.3 PCR
2.2.4 割胶回收
2.2.5 质粒构建
2.2.6 转化
2.2.7 质粒小抽
2.2.8 质粒大抽
2.2.9 qRT-PCR(total RNA)
2.2.10 miRNAs qRT-PCR
2.2.11 转录组学分析(RNA-Seq)
2.2.12 BCA测定蛋白浓度
2.2.13 免疫印迹实验Western Blot
2.2.14 DLR双荧光素酶实验
3 实验结果
3.1 miRNAs筛选
3.2 miR-210在果蝇感光神经元中表达
3.3 miR-210在其他感觉神经元中表达
3.4 miR-210KO-GAL4 突变体眼睛存在严重缺陷
3.5 miR-210缺失导致果蝇成虫感光神经元产生缺陷
3.6 miR-210从蛹期开始影响果蝇眼睛发育
3.7 miR-210缺失加速感光神经元退化
3.8 miR-210缺失导致眼睛脂滴累积
3.9 miR-210调控脂质代谢
3.10 miR-210 通过SREBP通路调控脂质代谢
3.11 miR-210的RNA-Seq结果分析
3.12 ACS是 miR-210 的靶标基因
4 讨论
5 创新与不足
参考文献
作者简历
本文编号：3451408
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：140 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 miRNAs研究进展
1.1.1 miRNAs的研究历史
1.1.2 miRNAs的生物合成机制
1.1.3 miRNAs的作用机制
1.1.4 鉴定miRNAs的靶标基因
1.1.5 miRNAs的功能
1.1.5.1 miRNAs与心血管疾病(心脏重塑)
1.1.5.2 miRNAs与炎症反应
1.1.5.3 miRNAs与血管生成
1.1.5.4 miRNAs与代谢
1.1.5.5 miRNAs与癌症
1.1.5.6 miRNAs与神经系统
1.1.5.7 miRNAs与病毒
1.1.6 miRNAs与感觉神经系统
1.2 miR-210研究进展
1.2.1 miR-210 与低氧的联系:miR-210与HIF形成正反馈调节机制
1.2.2 miR-210 与疾病:miR-210 可以作为肿瘤检测的标记物
1.2.3 miR-210与感觉神经系统
1.2.4 果蝇miR-210研究进展
1.3 模式生物:果蝇
1.3.1 果蝇作为模式生物的优势
1.3.2 模式生物果蝇研究工具
1.3.3 研究模型:果蝇成虫眼睛
1.3.4 脂质代谢对果蝇眼睛功能的影响
1.4 SREBP研究进展
1.5 ACS研究进展
2 实验材料与方法
2.1 果蝇相关实验
2.1.1 果蝇培养方法及实验方法
2.1.2 果蝇基因组DNA粗提取
2.1.3 果蝇基因组DNA精提取
2.1.4 果蝇total RNA提取
2.1.5 果蝇miRNAs提取
2.1.6 果蝇蛋白质提取
2.1.7 果蝇显微注射
2.1.8 果蝇幼虫组织解剖及免疫荧光染色
2.1.9 果蝇成虫眼睛组织解及免疫荧光染色
2.1.10 果蝇组织透射电镜样品制备方法
2.2 分子生化实验
2.2.1 CRISPR-Cas9
2.2.2 脂质组学分析(Lipid-MS)
2.2.3 PCR
2.2.4 割胶回收
2.2.5 质粒构建
2.2.6 转化
2.2.7 质粒小抽
2.2.8 质粒大抽
2.2.9 qRT-PCR(total RNA)
2.2.10 miRNAs qRT-PCR
2.2.11 转录组学分析(RNA-Seq)
2.2.12 BCA测定蛋白浓度
2.2.13 免疫印迹实验Western Blot
2.2.14 DLR双荧光素酶实验
3 实验结果
3.1 miRNAs筛选
3.2 miR-210在果蝇感光神经元中表达
3.3 miR-210在其他感觉神经元中表达
3.4 miR-210KO-GAL4 突变体眼睛存在严重缺陷
3.5 miR-210缺失导致果蝇成虫感光神经元产生缺陷
3.6 miR-210从蛹期开始影响果蝇眼睛发育
3.7 miR-210缺失加速感光神经元退化
3.8 miR-210缺失导致眼睛脂滴累积
3.9 miR-210调控脂质代谢
3.10 miR-210 通过SREBP通路调控脂质代谢
3.11 miR-210的RNA-Seq结果分析
3.12 ACS是 miR-210 的靶标基因
4 讨论
5 创新与不足
参考文献
作者简历
本文编号：3451408
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3451408.html
教材专著
