三种无缝克隆试剂盒连接效率的比较

发布时间：2021-10-22 21:58

　　目的比较生工生物工程（上海）股份有限公司、厂家A和厂家B三种无缝克隆试剂盒连接效率,为文库构建选择试剂盒提供参考。方法本研究采用Nco I和Xho I酶切pET26b获得线性化载体,PCR扩增制备线性化片段。无缝隙克隆反应体系转化感受态大肠杆菌,菌落PCR鉴定三种重组试剂盒连接阳性率。结果生工生物工程（上海）股份有限公司、厂家A和厂家B三种无缝克隆试剂盒分别长出107、86和16个克隆,阳性率分别为90.91%、72.73%和43.75%。结论从试剂盒性价比,转化总克隆数量和阳性克隆率等方面考虑,生工生物工程（上海）股份有限公司的无缝克隆试剂盒为文库构建的最佳选择。 

【文章来源】：中国医药科学. 2020,10(17)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

p ET26b酶切线性化核酸电泳图

生工、厂家A和厂家B三种无缝克隆试剂盒连接体系转化DH5α后，分别长出107、86和16个克隆。挑22、22和16个克隆菌液PCR鉴定。生工挑取22个单克隆菌液PCR鉴定，其中20个为阳性克隆，见图3。图4 厂家A无缝克隆试剂盒评价实验菌液PCR鉴定核酸电泳图

厂家A无缝克隆试剂盒评价实验菌液PCR鉴定核酸电泳图

【参考文献】：
期刊论文
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[2]无限制克隆技术研究进展及其应用[J]. 杨传辉,卢荣锐,杨愈丰.  生物化学与生物物理进展. 2019(07)
[3]无缝克隆方法构建玉米多基因表达载体[J]. 赵兴彦,卢凌霄,董建军,于洋,王银月,高珊,丛方志,李成军.  种子世界. 2018(07)
[4]一种新的DNA分子克隆方法[J]. 黄媛,陶颖,张文露,黄爱龙,胡接力.  中国科学:生命科学. 2011(09)



本文编号：3451907