白屈菜CmTLP基因克隆及植物转化载体构建

发布时间：2021-10-25 20:14

　　【目的】克隆白屈菜CmTLP基因并进行植物表达载体构建,为进一步研究CmTLP基因的功能及探索耐寒抗寒药用植物分子育种奠定基础。【方法】基于白屈菜转录组数据,分析得到白屈菜TLP基因开放阅读框,以18S RNA为内参基因,采用qRT-PCR法检测CmTLP基因在不同温度（20（CK）,10,0,-7,-20℃）下白屈菜植株中的相对表达量。用RT-PCR法克隆该基因并构建植物表达载体,电击法转化根癌农杆菌。【结果】qRT-PCR结果表明,CmTLP基因在-7℃、12 h时,相对表达量最高;-7℃、24 h时,相对表达量最低。克隆白屈菜TLP基因,命名为CmTLP。该基因开放阅读框长度为696 bp,编码由231个氨基酸组成的肽链;分子质量为24.66 ku,为酸性蛋白。系统发育树表明,CmTLP基因与博落回、月季、胡桃的氨基酸序列有较高的同源性。构建了植物表达载体pRI201-AN-CmTLP,并成功转化根癌农杆菌。【结论】克隆了白屈菜CmTLP基因,构建植物表达载体pRI201-AN-CmTLP,并成功转化根癌农杆菌。 

【文章来源】：西北农林科技大学学报(自然科学版). 2020,48(09)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

不同低温胁迫处理白屈菜CmTLP基因的相对表达量

将纯化的PCR产物与pMD19-T连接,从筛选出的阳性克隆培养物中提取质粒DNA,pMD19-T-CmTLP经Nde Ⅰ和Sac Ⅰ双酶切,在电泳图上可见2 600 bp和700 bp附近有条带,与载体pMD19-T和TLP片段大小一致,表明亚克隆载体构建完成(图2-b)。2.3 白屈菜CmTLP基因的生物信息学分析

用ProtParam预测TLP基因编码的蛋白质分子式为C1 081H1 631N295O333S18,分子质量为24.66 ku;等电点(pI)为4.80,是酸性蛋白;不稳定系数(Ⅱ)为26.74,属于稳定蛋白(不稳定指数>40为不稳定蛋白);平均亲水指数为-0.137,为亲水性蛋白。正电荷氨基酸残基(Arg+Lys)为14个,占6.06%;负电荷氨基酸残基(Asp+Glu)为18个,占7.79%;其开放阅读框长696 bp,可编码231个氨基酸(图3)。2.3.2 系统发育树

【参考文献】：
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本文编号：3458093