人间充质干细胞体外扩增培养过程中的衰老
发布时间：2021-10-30 05:32
MSCs是一类具有跨胚层分化能力的多能成体干细胞,在基础研究中多用体外扩大培养的方法来获取更多的干细胞。但在干细胞体外扩大培养的过程中,存在有干性难维持和细胞易分化等问题。而细胞衰老的重要诱因是体内外细胞环境的变化、细胞复制压力的增加、细胞间信息交流变化等。所以探究干细胞在体外扩大培养过程中是否有衰老变化,能够为干细胞的应用研究提供理论依据。本实验选用hUC-MSCs为实验材料,以1:2的传代比率传代培养获得P5,P10,P15,P20,P25和P30 hUC-MSCs。通过细胞形态分析发现,hUC-MSCs在传代培养过程中虽然始终保持成纤维样的细胞形态,但随传代数的增加出现体积增大、扁平化和囊泡增多的现象。通过流式细胞仪检测发现hUC-MSCs表面标志蛋白CD105的表达随着传代数的增加而显著降低,但克隆形成实验结果显示各代hUC-MSCs相较于P5 hUC-MSCs的克隆形成无明显差异。通过β-半乳糖苷酶蛋白表达量检测发现在P10开始表达β-半乳糖苷酶,即hUC-MSCs在P10开始出现分子水平上衰老。此外,细胞增殖实验结果显示P10,P15,P20,P25和P30 hUC-MSC...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同传代数hUC-MSCs细胞形态图
28图 2.2 P5, P10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 表面标志蛋白 CD105 表达逐渐变化A 为 P5, P10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 的流式细胞分析图，每代 hUC-MSCs 分别用矩形门圈定D105 阳性率，十字门圈定 CD73 和 CD90 双阳性率。B 为 CD105 的引物验证和 RT-qPCR 结果。引物所用凝胶为 3%的琼脂糖凝胶，Marker 为 DL500 Marker，目的条带为 160bp，M 为 Marker；RT-qP内参基因为 GAPDH，定量计算方式为 2-△△CT相对定量，***为 P＜0.001，****为 P＜0.0001。C 为 PP10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 的 CD105 Western blot 数据结果。Figure 2.2 P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs surface marker protein CD105 expression graduallychangedis a flow cytometric analysis of P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs. Each generation of hUC-MSses a rectangular gate to limit the positive rate of CD105, and the cross gate limits the CD73 and CD90 dou
内蒙古大学硕士学位论文positive rate.B is the primer verification and RT-qPCR results of CD105. The gel used for primer verification was 3% agarosegel, Marker was DL500 Marker, the target band was 160 bp, M was Marker; RT-qPCR reference gene wasGAPDH, and the quantitative calculation method was 2-△△CTrelative quantification, *** is P < 0.001, and **** isP < 0.0001.C is the CD105 Western blot data of P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs.4.1.3 不同代数 hUC-MSCs 的克隆形成能力检测此外我们还检测了细胞的克隆形成能力。根据对图 A 中的蓝色细胞集落的计数及三组平行实验数据的统计分析我们发现，相较于 P5hUC-MSCs，P10,P15,P20,P25 和 P30hUC-MSCs的克隆形成能力并无差异。
本文编号：3466149
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同传代数hUC-MSCs细胞形态图
28图 2.2 P5, P10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 表面标志蛋白 CD105 表达逐渐变化A 为 P5, P10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 的流式细胞分析图，每代 hUC-MSCs 分别用矩形门圈定D105 阳性率，十字门圈定 CD73 和 CD90 双阳性率。B 为 CD105 的引物验证和 RT-qPCR 结果。引物所用凝胶为 3%的琼脂糖凝胶，Marker 为 DL500 Marker，目的条带为 160bp，M 为 Marker；RT-qP内参基因为 GAPDH，定量计算方式为 2-△△CT相对定量，***为 P＜0.001，****为 P＜0.0001。C 为 PP10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 的 CD105 Western blot 数据结果。Figure 2.2 P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs surface marker protein CD105 expression graduallychangedis a flow cytometric analysis of P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs. Each generation of hUC-MSses a rectangular gate to limit the positive rate of CD105, and the cross gate limits the CD73 and CD90 dou
内蒙古大学硕士学位论文positive rate.B is the primer verification and RT-qPCR results of CD105. The gel used for primer verification was 3% agarosegel, Marker was DL500 Marker, the target band was 160 bp, M was Marker; RT-qPCR reference gene wasGAPDH, and the quantitative calculation method was 2-△△CTrelative quantification, *** is P < 0.001, and **** isP < 0.0001.C is the CD105 Western blot data of P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs.4.1.3 不同代数 hUC-MSCs 的克隆形成能力检测此外我们还检测了细胞的克隆形成能力。根据对图 A 中的蓝色细胞集落的计数及三组平行实验数据的统计分析我们发现，相较于 P5hUC-MSCs，P10,P15,P20,P25 和 P30hUC-MSCs的克隆形成能力并无差异。
本文编号：3466149
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