基于CRISPR/Cas9系统的拟南芥ugt84a1/ugt84a2双突变体制作及突变位点分析

发布时间：2021-11-03 12:33

　　CRISPR/Cas9基因编辑技术相对于锌指核酸酶（ZFNs）和转录激活因子效应物核酸酶（TALENs）而言,具有操作简便、突变效率高等优点,已经被广泛应用于医学、动物科学、植物科学等领域。拟南芥糖基转移酶UGT84A1、UGT84A2参与植物次生代谢及外源毒物反应,并且为同工酶。本研究以拟南芥糖基转移酶同工酶基因UGT84A1和UGT84A2为靶向基因,构建CRISPR/Cas9双突变体表达载体,并转化到农杆菌浸染拟南芥,从而同时定向敲除靶向基因。根据拟南芥转基因后代的测序结果,对获得的42株阳性转化植株进行突变位点分析,结果表明,有2株阳性植株发生双突变,由此成功构建了ugt84a1/ugt84a2双突变体。试验结果可为加快ugt84a1/ugt84a2功能基因资源的开发利用提供有力的理论与方法支持。 

【文章来源】：江苏农业科学. 2020,48(20)

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 gRNA引物设计
    1.3 CPRSPR/Cas9载体的构建
    1.4 农杆菌转化拟南芥
    1.5 拟南芥双突变体的检测
2 结果与分析
    2.1 sgRNA靶点序列的选择
    2.2 载体的构建及其验证
    2.3 拟南芥双突变体的筛选与检测
        2.3.1 ugt84a1突变体植株嵌合体序列分析
        2.3.2 ugt84a1突变体纯合体筛选
        2.3.3 ugt84a1/ugt84a2双突变体筛选
3 讨论与结论



本文编号：3473691