依赖Ⅱ型CAP的细菌转录激活的结构基础
发布时间：2021-11-04 02:20
转录激活是基因表达、基因表达调控和发育的基础。转录激活的过程需要RNA聚合酶、转录激活蛋白、DNA和核糖核苷酸的参与。大肠杆菌中的代谢物激活蛋白（catabolite activator protein,CAP）是第一个被鉴定纯化的转录激活蛋白,也是第一个获得三维结构的转录激活蛋白。大肠杆菌的CAP能够激活100多个基因的转录,是一类经典的转录激活蛋白。CAP被称为c AMP受体蛋白,与变构因子c AMP结合后,构象发生改变才能激活转录。最简单的CAP依赖的启动子只需要CAP,无需其他辅助因子即可激活转录,根据其DNA结合位点的不同可分为两类:第一类是CAP的DNA结合位点位于RNA聚合酶的DNA结合位点的上游,如lac启动子,人工启动子CC（-61.5）;第二种是CAP的DNA结合位点与RNA聚合酶的DNA结合位点部分重叠,如gal启动子,人工启动子CC（-41.5）。解析完整的转录激活复合物的结构对于探究转录激活机制有非常重要的意义。目前的研究已经获得了大肠杆菌的I型CAP依赖的转录激活复合物和嗜热栖热菌的II型CAP依赖的转录激活复合物结构,结构显示嗜热栖热菌的CAP不需要c A...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CAP的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳图
浙江大学硕士学位论文4实验结果19可知σ纯度较高。通过PEI沉淀、硫酸铵盐析、Ni柱亲和层析、离子交换层析、分子筛等蛋白纯化手段纯化了RNA聚合酶核心酶，电泳鉴定如图4.2A泳道2所示，可知虽有少许杂蛋白，但是蛋白纯度总体较高。RNA聚合酶全酶的纯化图谱如图4.2B所示，电泳鉴定图谱如图4.2A泳道3所示，表明RNA聚合酶的纯度较高，分离效果好。图4.2RNA聚合酶纯化鉴定（A）RNA聚合酶纯化鉴定电泳图1：纯化的σ；2：纯化的RNA聚合酶核心酶；3：纯化后的RNA聚合酶全酶。（B）RNA聚合酶纯化图谱。4.2II型CAP依赖的转录激活复合物的结构特征为了得到完整的II型CAP依赖的转录激活复合物，我们设计了一个能够代表II型CAP依赖的启动子CC63核酸骨架（图4.3），位置是从-63到+15。这个核酸骨架包含了保守的CAP结合位点，保守的-10延伸区，保守的-10区，保守的discriminatorelement，保守的核心识别元件，13bp的转录泡（模板链和非模板链维持解旋的状态）。
浙江大学硕士学位论文4实验结果19可知σ纯度较高。通过PEI沉淀、硫酸铵盐析、Ni柱亲和层析、离子交换层析、分子筛等蛋白纯化手段纯化了RNA聚合酶核心酶，电泳鉴定如图4.2A泳道2所示，可知虽有少许杂蛋白，但是蛋白纯度总体较高。RNA聚合酶全酶的纯化图谱如图4.2B所示，电泳鉴定图谱如图4.2A泳道3所示，表明RNA聚合酶的纯度较高，分离效果好。图4.2RNA聚合酶纯化鉴定（A）RNA聚合酶纯化鉴定电泳图1：纯化的σ；2：纯化的RNA聚合酶核心酶；3：纯化后的RNA聚合酶全酶。（B）RNA聚合酶纯化图谱。4.2II型CAP依赖的转录激活复合物的结构特征为了得到完整的II型CAP依赖的转录激活复合物，我们设计了一个能够代表II型CAP依赖的启动子CC63核酸骨架（图4.3），位置是从-63到+15。这个核酸骨架包含了保守的CAP结合位点，保守的-10延伸区，保守的-10区，保守的discriminatorelement，保守的核心识别元件，13bp的转录泡（模板链和非模板链维持解旋的状态）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]冷冻电镜技术的应用与发展[J]. 张晓凯,张丛丛,刘忠民,刘力嘉,夏蕾. 科学技术与工程. 2019(24)
[2]细菌RNA聚合酶抑制剂的分子生物学机制研究进展[J]. 史婧,冯钰. 浙江大学学报(医学版). 2019(01)
本文编号：3474800
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CAP的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳图
浙江大学硕士学位论文4实验结果19可知σ纯度较高。通过PEI沉淀、硫酸铵盐析、Ni柱亲和层析、离子交换层析、分子筛等蛋白纯化手段纯化了RNA聚合酶核心酶，电泳鉴定如图4.2A泳道2所示，可知虽有少许杂蛋白，但是蛋白纯度总体较高。RNA聚合酶全酶的纯化图谱如图4.2B所示，电泳鉴定图谱如图4.2A泳道3所示，表明RNA聚合酶的纯度较高，分离效果好。图4.2RNA聚合酶纯化鉴定（A）RNA聚合酶纯化鉴定电泳图1：纯化的σ；2：纯化的RNA聚合酶核心酶；3：纯化后的RNA聚合酶全酶。（B）RNA聚合酶纯化图谱。4.2II型CAP依赖的转录激活复合物的结构特征为了得到完整的II型CAP依赖的转录激活复合物，我们设计了一个能够代表II型CAP依赖的启动子CC63核酸骨架（图4.3），位置是从-63到+15。这个核酸骨架包含了保守的CAP结合位点，保守的-10延伸区，保守的-10区，保守的discriminatorelement，保守的核心识别元件，13bp的转录泡（模板链和非模板链维持解旋的状态）。
浙江大学硕士学位论文4实验结果19可知σ纯度较高。通过PEI沉淀、硫酸铵盐析、Ni柱亲和层析、离子交换层析、分子筛等蛋白纯化手段纯化了RNA聚合酶核心酶，电泳鉴定如图4.2A泳道2所示，可知虽有少许杂蛋白，但是蛋白纯度总体较高。RNA聚合酶全酶的纯化图谱如图4.2B所示，电泳鉴定图谱如图4.2A泳道3所示，表明RNA聚合酶的纯度较高，分离效果好。图4.2RNA聚合酶纯化鉴定（A）RNA聚合酶纯化鉴定电泳图1：纯化的σ；2：纯化的RNA聚合酶核心酶；3：纯化后的RNA聚合酶全酶。（B）RNA聚合酶纯化图谱。4.2II型CAP依赖的转录激活复合物的结构特征为了得到完整的II型CAP依赖的转录激活复合物，我们设计了一个能够代表II型CAP依赖的启动子CC63核酸骨架（图4.3），位置是从-63到+15。这个核酸骨架包含了保守的CAP结合位点，保守的-10延伸区，保守的-10区，保守的discriminatorelement，保守的核心识别元件，13bp的转录泡（模板链和非模板链维持解旋的状态）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]冷冻电镜技术的应用与发展[J]. 张晓凯,张丛丛,刘忠民,刘力嘉,夏蕾. 科学技术与工程. 2019(24)
[2]细菌RNA聚合酶抑制剂的分子生物学机制研究进展[J]. 史婧,冯钰. 浙江大学学报(医学版). 2019(01)
本文编号：3474800
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3474800.html
教材专著
