人脐带间充质干细胞分泌的胞外囊泡对施万细胞增殖和迁移影响的研究
发布时间：2021-11-04 01:20
目的探讨人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）源胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）对施万细胞（schwann cells,SCs）增殖和迁移的影响,为修复周围神经损伤提供新的治疗方向和新的思路。本课题通过提取、培养人源性脐带间充质干细胞胞外囊泡并与大鼠坐骨神经的SCs相互作用,从体外、体内证实hUCMSC-EVs促进SCs的增殖与迁移,促进受损神经的修复,为组织工程应用胞外囊泡修复受损周围神经的研究提供理论依据与实践探索。方法（1）人脐带间充质干细胞的分离和鉴定。（2）应用超高速离心法从hUCMSCs上清液中分离和纯化EVs（hUCMSC-EVs）,透射电镜观察EVs形态特征。Western blot法检测EVs标志性蛋白CD63和CD9的表达。（3）施万细胞（Schwann cell,SCs）提取及鉴定。（4）通过CCK-8和TranswellTM小室实验检测不同浓度的hUCMSC-EVs对SCs增殖和迁移能力的影响。（5）共聚焦显微镜观察原代SC...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A、B原代hUCMSC的提取，A为P0代形态，B为P4代形态；Figure3.1：ExtractionofhUCMSCs；A：ThemorphologyofP0generation；B：ThemorphologyofP4
人脐带间充质干细胞分泌的胞外囊泡对施万细胞增殖和迁移影响的研究16图3.1A、B原代hUCMSC的提取，A为P0代形态，B为P4代形态；Figure3.1：ExtractionofhUCMSCs；A：ThemorphologyofP0generation；B：ThemorphologyofP4generation.图3.2hUCMSCs茜素红、油红O染色以及流式细胞仪鉴定结果分析Figure3.2AandB:MorphologyofhUCMSCs(passages0and3)underlightmicroscopy(×100magnification).CandD:hUCMSCsinducedfordifferentiationintoosteocytes(×100)andadipocytes(×200).CellsstainedwithAlizarinRedandOilredO.E:ResultsfortheflowcytometryanalysesofphenotypicmarkersrelatedtohUCMSCs.
江苏大学硕士学位论文173.4.2人脐带间充质干细胞分泌的胞外囊泡(hUCMSC-EVs)的鉴定EVs是由细胞膜分离的纳米级膜泡，具有亚细胞结构，负载多种生物活性物质（蛋白质、脂质和RNA）介导细胞间信息通讯[19]。来源于不同细胞的EVs具有多种生物学功能，例如细胞增殖、存活和转化，其在组织工程和再生医学领域已被广泛关注[19]。透射电镜结果显示，hUCMSC-EVs呈圆形或椭圆形（图3.3A）；我们前期的研究结果表明，hUCMSC-EVs的粒径范围在80-650nm，平均粒径为168nm。hUCMSCs和hUCMSC-EVs均表达胞外囊泡特异性标志蛋白CD9和CD63（图3.3B）。结果证实，本研究提取的hUCMSC-EVs具备典型细胞外囊泡的基本特性。..图3.3A：透射电镜观察hUCMSC-EVs形态特征，标尺：100nm，（黑色箭头指示为EVs）；B：蛋白质印迹检测hUCMSC-EVs标志CD9、CD63表达；Figure3.2A：MorphologicalcharacteristicsofhUCMSC-EVswereobservedbytransmissionelectronmicroscopy,size:100nm,（BlackarrowisEVs）；B：FilteredEVswereresuspendedinPBS,incubatedandstainedwith20μLofthedirectlyfluorescentantibodyCD63(BDBiosciences)forthedetectionofthetypicalsurfacemarkersofhUCMSC-EVs.3.5讨论间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）是一类具有多向分化潜能并能进行不断自我更新的成体干细胞[20]。最近的报告发现MSC分泌可以分为三类：细胞外囊泡（如微泡）、微囊（MVs）和外泌体。MSCs能够分泌生物活性物质，帮助重建神经损伤后再建的微环境[21]。鉴于这些特点，MSCs被认为是很有前途的神经损伤修复和再生的工具[22]。间充质干细胞的再生潜能由旁分泌作用介导[23]。hUCMSCs的旁分泌途径比BMSC等作用更强[24]。越来越多的证据表明，hUCMSCs在周围神经损伤
本文编号：3474719
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A、B原代hUCMSC的提取，A为P0代形态，B为P4代形态；Figure3.1：ExtractionofhUCMSCs；A：ThemorphologyofP0generation；B：ThemorphologyofP4
人脐带间充质干细胞分泌的胞外囊泡对施万细胞增殖和迁移影响的研究16图3.1A、B原代hUCMSC的提取，A为P0代形态，B为P4代形态；Figure3.1：ExtractionofhUCMSCs；A：ThemorphologyofP0generation；B：ThemorphologyofP4generation.图3.2hUCMSCs茜素红、油红O染色以及流式细胞仪鉴定结果分析Figure3.2AandB:MorphologyofhUCMSCs(passages0and3)underlightmicroscopy(×100magnification).CandD:hUCMSCsinducedfordifferentiationintoosteocytes(×100)andadipocytes(×200).CellsstainedwithAlizarinRedandOilredO.E:ResultsfortheflowcytometryanalysesofphenotypicmarkersrelatedtohUCMSCs.
江苏大学硕士学位论文173.4.2人脐带间充质干细胞分泌的胞外囊泡(hUCMSC-EVs)的鉴定EVs是由细胞膜分离的纳米级膜泡，具有亚细胞结构，负载多种生物活性物质（蛋白质、脂质和RNA）介导细胞间信息通讯[19]。来源于不同细胞的EVs具有多种生物学功能，例如细胞增殖、存活和转化，其在组织工程和再生医学领域已被广泛关注[19]。透射电镜结果显示，hUCMSC-EVs呈圆形或椭圆形（图3.3A）；我们前期的研究结果表明，hUCMSC-EVs的粒径范围在80-650nm，平均粒径为168nm。hUCMSCs和hUCMSC-EVs均表达胞外囊泡特异性标志蛋白CD9和CD63（图3.3B）。结果证实，本研究提取的hUCMSC-EVs具备典型细胞外囊泡的基本特性。..图3.3A：透射电镜观察hUCMSC-EVs形态特征，标尺：100nm，（黑色箭头指示为EVs）；B：蛋白质印迹检测hUCMSC-EVs标志CD9、CD63表达；Figure3.2A：MorphologicalcharacteristicsofhUCMSC-EVswereobservedbytransmissionelectronmicroscopy,size:100nm,（BlackarrowisEVs）；B：FilteredEVswereresuspendedinPBS,incubatedandstainedwith20μLofthedirectlyfluorescentantibodyCD63(BDBiosciences)forthedetectionofthetypicalsurfacemarkersofhUCMSC-EVs.3.5讨论间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）是一类具有多向分化潜能并能进行不断自我更新的成体干细胞[20]。最近的报告发现MSC分泌可以分为三类：细胞外囊泡（如微泡）、微囊（MVs）和外泌体。MSCs能够分泌生物活性物质，帮助重建神经损伤后再建的微环境[21]。鉴于这些特点，MSCs被认为是很有前途的神经损伤修复和再生的工具[22]。间充质干细胞的再生潜能由旁分泌作用介导[23]。hUCMSCs的旁分泌途径比BMSC等作用更强[24]。越来越多的证据表明，hUCMSCs在周围神经损伤
本文编号：3474719
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