突变型pVenus-cdc25b表达载体的构建及其功能初探
发布时间：2021-12-02 02:56
Cdc25b（cell division cycle 25b）,细胞分裂周期25b磷酸酶,cdc25磷酸酶家族成员之一,是一种Thr/Tyr双特异性蛋白磷酸酶,在哺乳动物细胞周期调控过程中起到逆转抑制磷酸化的作用。在生殖细胞的减数分裂恢复过程中,cdc25b可以使细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase）CDK1上14/Thr和15/Tyr上发生去磷酸化,从而导致CDK1活性恢复与周期蛋白CyclinB结合发挥功能,启动细胞分裂的进行。Cdc25b蛋白磷酸酶上有两种特异性的短序列,分别是核定位和核输出信号,在细胞质和细胞核的动态穿梭过程中发挥功能,该蛋白磷酸酶在细胞减数分裂启动之前由细胞质进入细胞核,细胞减数分裂恢复由细胞核输出进入细胞质。同时,cdc25b蛋白磷酸酶活性受到磷酸化或去磷酸化作用的调节,在cdc25b上也存在有相应的磷酸化修饰位点149位Ser和321位Ser,蛋白激酶PKA（protein kinase A）通过磷酸化或去磷酸化作用对cdc25b上的这两个位点进行修饰从而调控该酶活性,维持或解除细胞减数分裂的阻滞,进一步来调节细胞周期的进...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞分裂周期示意图（Lodishetal.2000）
要性越来越受到人们的重视（Adhikari et al. 2014）。细胞周期调控对于细胞存活状态至关重要，在细胞周期的循环过程中需要对细胞遗传物质损伤的检测及修复不受控制的异常发生。细胞周期的发生是在相关因素的指导下一个定向有序的调控过程；也就是说，每个过程都是按照特定的时间和空间顺序去发生。因此，哺乳动物细胞通过有序的增殖分裂方式活动进行生命的延续。1.2 细胞分裂的分子机制涉及启动细胞分裂的分子信号通路如图 1-2 所示，由图可知，在 G2发生后期，cdc25b 和 cdc25c 两种亚型激活 CDK1-CyclinB 复合物。在分裂间期，cdc25b 和 cdc25通过磷酸化作用活性收到抑制，结合 14-3-3 蛋白滞留细胞质中。cdc25b 活性激活被认为是中心体上 Cdk1-CyclinB 的初始激活启动机制。由 AURA（aurora kinaseA）激酶和PLK1（Polo-like kinase 1）激酶依赖于 cdc25b 磷酸酶 N 端的磷酸化或去磷酸化作用从而触发 cdc25b 的激活促进了 cdc25b 在细胞质核之间的动态穿梭，启动细胞有丝分裂。cdc25c 与 14-3-3 蛋白解离后，PP1 磷酸酶可消除对 cdc25c 的磷酸化抑制作用。这与PLK1 介导的 cdc25c 的 N 末端磷酸化促进其入核和直接刺激磷酸酶的催化活性相一致。
cdc25b 的活性（Astuti et al. 2010）。cdc25b 蛋白序列上有两种特异信号和核定位信号，都被所有三种亚型的 N 端区域所识别，从而确细胞质核动态穿梭。和其他 cdc25 家族成员一样，cdc25b 也是 DN白。众所周知，在外源因素紫外光照下，p38 激活会导致发生磷酸3 蛋白进行结合，这一结果使 cdc25b 保持活性稳定在细胞质中出现 cdc25b 激活 CDK/Cyclin 底物的通路。然而，尽管 p38 在 cdc25b 失用，但 p38 是否对 cdc25b 上的 323 位丝氨酸直接磷酸化却受到质疑cdc25b 与 PLK1 激酶互相作用之后对有丝分裂的启动是必不可少的究清楚地表明，cdc25b 的表达是细胞能否顺利通过 G2/M 检查点所cdc25b 水平在检查点活性恢复被认为是这一过程的核心。cdc25 磷酸酶对 DNA 损伤的调节作用如图 1-4 所示，在紫外线（U）照射下，外源因素触发 P38 及 Chk2 依赖激酶信号通路导致细胞 D于 cdc25 磷酸酶的特异性磷酸化位点抑制 cdc25 磷酸酶活性。同时olyUB）添加到 cdc25a 中，通过泛素化修饰对靶蛋白进行降解，进周期来实现对 DNA 损伤修复。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CDC25A与肿瘤的研究进展[J]. 唐艳萍,曹骥. 癌症进展. 2018(15)
[2]基于PCR的质粒快速定点诱变方法建立与评价[J]. 陈凡,傅一勤,林梅西,汪少芸. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(01)
[3]14-3-3ε蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂恢复过程中对Cdc25B定位的影响[J]. 孟峻,侯艳军,刘珊,樊淑珍,韩艳秋. 吉林大学学报(医学版). 2017(06)
[4]CDC25B蛋白亚细胞定位调控小鼠1-细胞期受精卵发育[J]. 肖建英,刘超,孙小涵,于秉治. 中国生物化学与分子生物学报. 2013(01)
[5]蛋白激酶A对CDC25B蛋白S149与S321位点磷酸化的修饰抑制小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂[J]. 肖建英,刘超,孙小涵,于秉治. 生理学报. 2012(01)
[6]猪H1foo基因的克隆与真核表达载体的构建[J]. 李伟,吴苏君,杨文琳,史芸安,井勇,赵贵民,云彦,雷安民. 农业生物技术学报. 2012(01)
[7]dbcAMP通过Cdc25B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育[J]. 刘超,肖建英,孙小涵,于秉治. 中国生物化学与分子生物学报. 2011(10)
[8]Cdc25B蛋白过表达可使小鼠胚胎突破2-细胞期阻滞[J]. 崔城,汤浩,于秉治. 中国应用生理学杂志. 2008(01)
[9]卵母细胞成熟过程MPF的调控和MPF的作用底物[J]. 夏蕾,张岭,吴坤. 疾病控制杂志. 2007(06)
[10]小鼠Cdc25B核输出序列[J]. 赵鸿梅,崔城,徐小燕,于秉治. 细胞生物学杂志. 2007(04)
硕士论文
[1]小鼠受精卵早期发育过程中不同细胞期Cdc25B的活性变化[D]. 李雪松.中国医科大学 2006
本文编号：3527586
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞分裂周期示意图（Lodishetal.2000）
要性越来越受到人们的重视（Adhikari et al. 2014）。细胞周期调控对于细胞存活状态至关重要，在细胞周期的循环过程中需要对细胞遗传物质损伤的检测及修复不受控制的异常发生。细胞周期的发生是在相关因素的指导下一个定向有序的调控过程；也就是说，每个过程都是按照特定的时间和空间顺序去发生。因此，哺乳动物细胞通过有序的增殖分裂方式活动进行生命的延续。1.2 细胞分裂的分子机制涉及启动细胞分裂的分子信号通路如图 1-2 所示，由图可知，在 G2发生后期，cdc25b 和 cdc25c 两种亚型激活 CDK1-CyclinB 复合物。在分裂间期，cdc25b 和 cdc25通过磷酸化作用活性收到抑制，结合 14-3-3 蛋白滞留细胞质中。cdc25b 活性激活被认为是中心体上 Cdk1-CyclinB 的初始激活启动机制。由 AURA（aurora kinaseA）激酶和PLK1（Polo-like kinase 1）激酶依赖于 cdc25b 磷酸酶 N 端的磷酸化或去磷酸化作用从而触发 cdc25b 的激活促进了 cdc25b 在细胞质核之间的动态穿梭，启动细胞有丝分裂。cdc25c 与 14-3-3 蛋白解离后，PP1 磷酸酶可消除对 cdc25c 的磷酸化抑制作用。这与PLK1 介导的 cdc25c 的 N 末端磷酸化促进其入核和直接刺激磷酸酶的催化活性相一致。
cdc25b 的活性（Astuti et al. 2010）。cdc25b 蛋白序列上有两种特异信号和核定位信号，都被所有三种亚型的 N 端区域所识别，从而确细胞质核动态穿梭。和其他 cdc25 家族成员一样，cdc25b 也是 DN白。众所周知，在外源因素紫外光照下，p38 激活会导致发生磷酸3 蛋白进行结合，这一结果使 cdc25b 保持活性稳定在细胞质中出现 cdc25b 激活 CDK/Cyclin 底物的通路。然而，尽管 p38 在 cdc25b 失用，但 p38 是否对 cdc25b 上的 323 位丝氨酸直接磷酸化却受到质疑cdc25b 与 PLK1 激酶互相作用之后对有丝分裂的启动是必不可少的究清楚地表明，cdc25b 的表达是细胞能否顺利通过 G2/M 检查点所cdc25b 水平在检查点活性恢复被认为是这一过程的核心。cdc25 磷酸酶对 DNA 损伤的调节作用如图 1-4 所示，在紫外线（U）照射下，外源因素触发 P38 及 Chk2 依赖激酶信号通路导致细胞 D于 cdc25 磷酸酶的特异性磷酸化位点抑制 cdc25 磷酸酶活性。同时olyUB）添加到 cdc25a 中，通过泛素化修饰对靶蛋白进行降解，进周期来实现对 DNA 损伤修复。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CDC25A与肿瘤的研究进展[J]. 唐艳萍,曹骥. 癌症进展. 2018(15)
[2]基于PCR的质粒快速定点诱变方法建立与评价[J]. 陈凡,傅一勤,林梅西,汪少芸. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(01)
[3]14-3-3ε蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂恢复过程中对Cdc25B定位的影响[J]. 孟峻,侯艳军,刘珊,樊淑珍,韩艳秋. 吉林大学学报(医学版). 2017(06)
[4]CDC25B蛋白亚细胞定位调控小鼠1-细胞期受精卵发育[J]. 肖建英,刘超,孙小涵,于秉治. 中国生物化学与分子生物学报. 2013(01)
[5]蛋白激酶A对CDC25B蛋白S149与S321位点磷酸化的修饰抑制小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂[J]. 肖建英,刘超,孙小涵,于秉治. 生理学报. 2012(01)
[6]猪H1foo基因的克隆与真核表达载体的构建[J]. 李伟,吴苏君,杨文琳,史芸安,井勇,赵贵民,云彦,雷安民. 农业生物技术学报. 2012(01)
[7]dbcAMP通过Cdc25B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育[J]. 刘超,肖建英,孙小涵,于秉治. 中国生物化学与分子生物学报. 2011(10)
[8]Cdc25B蛋白过表达可使小鼠胚胎突破2-细胞期阻滞[J]. 崔城,汤浩,于秉治. 中国应用生理学杂志. 2008(01)
[9]卵母细胞成熟过程MPF的调控和MPF的作用底物[J]. 夏蕾,张岭,吴坤. 疾病控制杂志. 2007(06)
[10]小鼠Cdc25B核输出序列[J]. 赵鸿梅,崔城,徐小燕,于秉治. 细胞生物学杂志. 2007(04)
硕士论文
[1]小鼠受精卵早期发育过程中不同细胞期Cdc25B的活性变化[D]. 李雪松.中国医科大学 2006
本文编号：3527586
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3527586.html
教材专著
