β-伴大豆球蛋白α-亚基核心区的基因克
发布时间：2022-01-04 19:33
利用RT-PCR技术获得了齐黄34大豆种子的全长cDNA,采用自行设计的引物对目的基因αc进行扩增,并将目的基因与载体连接,构建了重组克隆载体pGEM-αc。重组克隆载体经XhoⅠ/EcoRⅠ双限制酶酶切鉴定后,与载体pET-28a连接构建重组质粒pET-28a-αc,经菌落PCR、双限制酶酶切及测序判定准确后,将其转入到感受态细胞E.coli BL21（DE3）中,当诱导温度为37℃、菌液OD600nm值为0.8、诱导剂（IPTG）浓度为0.2mmol/L,诱导时间为9h时,重组α-亚基核心区蛋白分子质量为50kU;工程菌pET-28a-αc-BL21经超声破裂、低温离心后,上清液利用镍离子亲和层析色谱柱经AKTA蛋白纯化系统纯化可以获得较高纯度的目的蛋白。
【文章来源】：食品与机械. 2020,36(05)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
大豆总RNA提取电泳图
目的基因片段α-亚基核心区的扩增结果
由图3可知，采用自行设计的特异性引物F1/R1对随机选取的5个菌株扩增得到的片段长度均为1 300bp左右，与目的基因的理论值相一致；而使用通用引物M47/M48扩增得到的片段长度为2 000bp左右，是因为特异性引物与通用引物的位点中间有一定的片段大小，因此该结果也与理论值相符。理论上而言，重组克隆载体经单酶切后应形成清晰而单一的条带，但pGEM-αc经EcoRⅠ单酶切后形成两个清晰条带，其大小分别与克隆载体和目的基因的理论值相符，是因为选用的克隆载体pGEM-T Easy上带有EcoRⅠ酶切位点；重组克隆载体经XhoⅠ单酶切后能形成单一条带，证实重组克隆载体构建成功；而经双酶切后重组克隆载体被切成两个较为清晰的条带，且大小分别为3 000bp与1 300bp左右，与载体pGEM-T Easy(3 015bp）和目的基因α-亚基核心区的理论值（1 265bp）相符。2.4 重组表达载体的构建、筛选及鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄曲霉毒素分解酶基因克隆及其在大肠杆菌中的融合表达[J]. 李旺,史敦胜,丁轲,曹平华,赵龙妹. 食品与机械. 2019(07)
[2]水稻脱落酸受体PYL2与mNeonGreen融合蛋白的原核表达及纯化[J]. 吴云华,吴亚婷,李勇. 中南民族大学学报(自然科学版). 2019(02)
[3]重组MBP-SUV39H1在大肠杆菌中表达与纯化[J]. 李剑,李丕龙. 生物技术. 2019(01)
[4]茶渣硒蛋白的分离纯化及其性质研究[J]. 杨旭,谢盈. 食品与机械. 2018(11)
[5]重组大豆7S球蛋白α′-亚基的分离纯化[J]. 余少璟,许妍妍,袁艳秋,周星杰,吉梦莹,栾广忠. 西北农业学报. 2017(12)
[6]羧甲基纤维素钠对大豆蛋白凝胶特性的影响[J]. 苗钟化,辛宜聪,曾瑞琪,郑炯. 食品与机械. 2017(04)
[7]β-伴大豆球蛋白α′-亚基的基因克隆及原核表达[J]. 许妍妍,董宇,王新,彭飞,孙晓静,余少璟,辰巳英三,栾广忠. 西北农业学报. 2017(02)
[8]植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化[J]. 王盼,费永涛,刘冬梅,黄娟,吴晖,余以刚,唐语谦,肖性龙. 现代食品科技. 2015(06)
[9]Mincle受体蛋白克隆、原核表达与纯化[J]. 严萍,朱喜梅,李璐,林文华,詹若挺,唐语谦. 现代食品科技. 2015(03)
[10]重组人胰岛素类似物蛋白在大肠杆菌中克隆、表达与纯化[J]. 杨宁,赵凌侠,唐克轩. 武汉大学学报(医学版). 2010(03)
博士论文
[1]碱性蛋白酶Alcalase凝固豆浆机理的研究[D]. 栾广忠.中国农业大学 2005
硕士论文
[1]7S大豆球蛋白α’-亚基的原核表达及纯化[D]. 许妍研.西北农林科技大学 2016
本文编号：3568938
【文章来源】：食品与机械. 2020,36(05)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
大豆总RNA提取电泳图
目的基因片段α-亚基核心区的扩增结果
由图3可知，采用自行设计的特异性引物F1/R1对随机选取的5个菌株扩增得到的片段长度均为1 300bp左右，与目的基因的理论值相一致；而使用通用引物M47/M48扩增得到的片段长度为2 000bp左右，是因为特异性引物与通用引物的位点中间有一定的片段大小，因此该结果也与理论值相符。理论上而言，重组克隆载体经单酶切后应形成清晰而单一的条带，但pGEM-αc经EcoRⅠ单酶切后形成两个清晰条带，其大小分别与克隆载体和目的基因的理论值相符，是因为选用的克隆载体pGEM-T Easy上带有EcoRⅠ酶切位点；重组克隆载体经XhoⅠ单酶切后能形成单一条带，证实重组克隆载体构建成功；而经双酶切后重组克隆载体被切成两个较为清晰的条带，且大小分别为3 000bp与1 300bp左右，与载体pGEM-T Easy(3 015bp）和目的基因α-亚基核心区的理论值（1 265bp）相符。2.4 重组表达载体的构建、筛选及鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄曲霉毒素分解酶基因克隆及其在大肠杆菌中的融合表达[J]. 李旺,史敦胜,丁轲,曹平华,赵龙妹. 食品与机械. 2019(07)
[2]水稻脱落酸受体PYL2与mNeonGreen融合蛋白的原核表达及纯化[J]. 吴云华,吴亚婷,李勇. 中南民族大学学报(自然科学版). 2019(02)
[3]重组MBP-SUV39H1在大肠杆菌中表达与纯化[J]. 李剑,李丕龙. 生物技术. 2019(01)
[4]茶渣硒蛋白的分离纯化及其性质研究[J]. 杨旭,谢盈. 食品与机械. 2018(11)
[5]重组大豆7S球蛋白α′-亚基的分离纯化[J]. 余少璟,许妍妍,袁艳秋,周星杰,吉梦莹,栾广忠. 西北农业学报. 2017(12)
[6]羧甲基纤维素钠对大豆蛋白凝胶特性的影响[J]. 苗钟化,辛宜聪,曾瑞琪,郑炯. 食品与机械. 2017(04)
[7]β-伴大豆球蛋白α′-亚基的基因克隆及原核表达[J]. 许妍妍,董宇,王新,彭飞,孙晓静,余少璟,辰巳英三,栾广忠. 西北农业学报. 2017(02)
[8]植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化[J]. 王盼,费永涛,刘冬梅,黄娟,吴晖,余以刚,唐语谦,肖性龙. 现代食品科技. 2015(06)
[9]Mincle受体蛋白克隆、原核表达与纯化[J]. 严萍,朱喜梅,李璐,林文华,詹若挺,唐语谦. 现代食品科技. 2015(03)
[10]重组人胰岛素类似物蛋白在大肠杆菌中克隆、表达与纯化[J]. 杨宁,赵凌侠,唐克轩. 武汉大学学报(医学版). 2010(03)
博士论文
[1]碱性蛋白酶Alcalase凝固豆浆机理的研究[D]. 栾广忠.中国农业大学 2005
硕士论文
[1]7S大豆球蛋白α’-亚基的原核表达及纯化[D]. 许妍研.西北农林科技大学 2016
本文编号：3568938
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3568938.html
