猪圆环病毒2型编码蛋白7的鉴定和功能研究
发布时间：2022-01-25 01:58
猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）是引起猪圆环病毒病（Porcine circovirus diseases,PCVDs）的病原,主要侵害感染猪的免疫细胞,导致严重的免疫抑制,使感染猪对其他病原的易感性增高,引起多种疾病的发生,严重危害生猪健康养殖和猪病防控。PCV2是目前发现的感染哺乳动物最小的DNA病毒,基因组由1766～1768个核苷酸组成,对病毒致病机理的阐明是防控疾病的基础,明确编码蛋白在病毒致病中的作用是揭示其致病机理的重要方面。PCV2基因组结构简单,生物信息学软件分析发现其基因组中存在11个潜在的开放读码框（Open reading frames,ORFs）,分别编码病毒的结构和非结构蛋白,在病毒致病中发挥作用,目前发现的只有6个ORFs（ORF1～6）。对新的ORF发现和鉴定将为PCV2病原学增加新成员,明确其在病毒致病中的作用,将为PCV2致病机理的揭示提供新的科学资料。我们发现PCV2基因组中存在一个保守的ORF,包含在ORF2基因中,在基因组的1524-1033核苷酸处（492 nt）,理论上可编码164个氨基酸,预测...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]NF-κB受体激活因子配体的表达及其多克隆抗体的制备[J]. 耿抒贤,刘果,张娜,刘旻翾,燕苗苗,金丽,曾巧英,刘光亮. 中国兽医科学. 2020(04)
[2]猪源转录因子AP-2δ通过增强rep基因启动子活性促进猪圆环病毒2型的复制[J]. 王越,宋东峰,林翠,李佳容,王胜男,顾金燕,周继勇. 生物工程学报. 2018(12)
[3]一起猪皮炎肾炎综合征的诊治[J]. 李肖冬. 广西畜牧兽医. 2010(06)
硕士论文
[1]YWHAB蛋白与PCV2 ORF5的互作研究及其对病毒复制的影响[D]. 侯玉凤.西北农林科技大学 2019
[2]ORF6在猪圆环病毒2型致病性中的作用研究[D]. 李冬歌.华中农业大学 2018
[3]猪圆环病毒2型ORF5蛋白诱导猪肺泡巨噬细胞自噬作用及对病毒复制的影响[D]. 李然.西北农林科技大学 2018
[4]猪圆环病毒2型ORF3蛋白互作蛋白的鉴定[D]. 徐霄.浙江理工大学 2018
本文编号：3607697
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１４?０ＲＦ７蛋白表达的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测??Ｆｉｇ．２－１４?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?０ＲＦ７?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??
?第三章猪圆环病毒２型０ＲＦ７蛋白对宿主细胞功能和病毒复制的影响???３?？?３结果??３．３．１?ＯＲＦ７蛋白对ＰＫ－１５细胞功能的影响??３．３．１．１?０ＲＦ７蛋白对ＰＫ－１５细胞内质网应激标志蛋白ＧＲＰ７８基因转录的影卩向??将?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－０ＲＦ７?重组质粒和?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ?质粒转染?ＰＫ－１５?细??胞后，通过ＲＴ－ｑＰＣＲ对ＰＫ－１５细胞中内质网应激标志蛋ｇ?ＧＲＰ７８?ｍＲＮＡ的表达??情况进行了检测。结果如图３－１所示，与转染ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ的ＰＫ－１５细胞组??相比较，转染ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－０ＲＦ７质粒的ＰＫ－１５细胞中，ＧＲＰ７８?ｍＲＮＡ在??１２ｈ、２４ｈ上调不显著（Ｐ＞０．０５），３６ｈ和４８ｈ被极显箸上调（Ｐ＜０．００１），??说明０ＲＦ７蛋白可能引起ＰＫ－１５细胞内质阿应激反应。??■?ＭＯＣＫ??ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ??｜?２〇?＾?Ｂ?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－ＯＲＦ７??ｋ?ａ??臣?１５－?，＊＊＊．?三??Ｏ?卜一Ｉ?三??＊５?自圍??１１０＇?ｎｓ?＾?＼?＼??１０?ａｔｐｉ?ｈ！?ｉ?ｉ［?ｉ??，；：＾?ｎｆ?鲁?ｆ??Ｔｉｍｅ（ｈ）??图３－１?ＯＲＦ７蛋白对ＰＫ－１５?ＧＲＰ７８基因转录的影响??Ｆｉｇ．３－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＯＲＦ７?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｎ?ＧＲＰ７８?ｉｎ?ＰＫ－１５?ｃｅｌｌｓ??３．３．１．２?ＯＲＦ７蛋白对ＰＫ－１５细胞活性的影响??将?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－ＯＲＦ７?重组质粒和?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ?质粒转染?ＰＫ－１５?细??胞后
ｒ?Ｂｃｌ－２?ｐｒｏｔｅｉｎ?ａｆｔｅｒ??ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?０ＲＦ７；?（ｄ）?ＲＴ－ｑＰＣＲ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?Ｂａｘ?ｍＲＮＡ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｆａｃｔｏｒ?ａｆｔｅｒ??ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?０ＲＦ７；?（ｅ－ｆ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ａｎｄ?ｇｒａｙ?ｓｃａｌｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?Ｂａｘ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｆ??ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｆａｃｔｏｒ?ａｆｔｅｒ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＯＲＦ７；??图３－６?ＯＲＦ７蛋白对ＰＫ－１５细胞Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ的影响??Ｆｉｇ．３－６?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＯＲＦ７?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｎ?Ｂｃｌ－２，?Ｂａｘ?ｉｎ?ＰＫ－１５?ｃｅｌｌｓ??同时，分析了?Ｂｃｌ－２／ＢａｘｍＲＮＡ水平的比值，结果如图３－７所示》ｉ与转染??ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ?质粒组相比较，转染?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－０ＲＦ７?质粒的?Ｂｃｌ＿２／Ｂａｘ??ｍＲＮＡ比值在１２?ｈ时无统计学差异（Ｐ＞０．０５?），在２４?ｈ￣４８?ｈ衰达量极显著上??升（Ｐ＜０．０１）。通过以上结果表明，０ＲＦ７蛋白是一个抗凋亡蛋白。??４－．?Ｂｌ?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－ＯＲＦ７??＜?ｒａ?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ??ｇ?３－?Ｂ?ＭＯＣＫ??｜?Ｉ?｜?＾?＾??ｉ；ｌ｜ｌ?ＩｊｌＢｊｌＬ??＃?ｎｆ?聲?＾??Ｔｉｍｅ（ｈ）??图３－７?０ＲＦ７蛋白对ＰＫ－１５细胞Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ?ｍＲＮＡ的影响??Ｆｉｇ．?３－７?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?０ＲＦ７?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｎ?Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ?ｍＲＮＡ?ｉｎ?
【参考文献】：
期刊论文
[1]NF-κB受体激活因子配体的表达及其多克隆抗体的制备[J]. 耿抒贤,刘果,张娜,刘旻翾,燕苗苗,金丽,曾巧英,刘光亮. 中国兽医科学. 2020(04)
[2]猪源转录因子AP-2δ通过增强rep基因启动子活性促进猪圆环病毒2型的复制[J]. 王越,宋东峰,林翠,李佳容,王胜男,顾金燕,周继勇. 生物工程学报. 2018(12)
[3]一起猪皮炎肾炎综合征的诊治[J]. 李肖冬. 广西畜牧兽医. 2010(06)
硕士论文
[1]YWHAB蛋白与PCV2 ORF5的互作研究及其对病毒复制的影响[D]. 侯玉凤.西北农林科技大学 2019
[2]ORF6在猪圆环病毒2型致病性中的作用研究[D]. 李冬歌.华中农业大学 2018
[3]猪圆环病毒2型ORF5蛋白诱导猪肺泡巨噬细胞自噬作用及对病毒复制的影响[D]. 李然.西北农林科技大学 2018
[4]猪圆环病毒2型ORF3蛋白互作蛋白的鉴定[D]. 徐霄.浙江理工大学 2018
本文编号：3607697
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