球孢白僵菌Endothiapepsin-like蛋白的毕赤酵母表达及酶活性的检测
发布时间：2022-02-21 23:23
Endothiapepsin蛋白是一种天冬氨酸蛋白水解酶,最初是从植物病菌丝状子囊菌栗疫菌（Endothia parasitic）分离鉴定的。然而在球孢白僵菌（Beauveria bassiana）基因组中也存在着编码endothiapepsin-like蛋白的基因（BbeapA）,本实验室在前期关于不同致病性球孢白僵菌菌株在早期阶段侵染家蚕表皮比较转录组学的研究中发现endothiapepsin-like蛋白和其他一些天冬氨酸蛋白酶在高毒力菌株GXsk1011中是上调表达的,但是该蛋白在致病过程中的作用以及其他一些功能在球孢白僵菌中尚未有报道。本实验在前期将编码endothiapepsin-like蛋白的基因进行了克隆和测序的基础上,将其氨基酸序列与来源于栗疫菌的endothiapepsin（CAA37944）、球孢白僵菌Bb2860菌株的endothiapepsin-like（XP008601085）、家蚕的病原aspergillopepsin A-like天冬氨酸蛋白酶（XP022385274）和烟曲霉的aspergillopepsin F（XP753324）的氨基酸序列进行多重...
【文章来源】：西南大学重庆市211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BbeapA的PCR扩增产物A：M：2000DNAmarker；1：pPIC9K-BbeapA-F/R引物的PCR扩增产物；
图 3.2 转化子的菌液 PCR 检测图 A：M：2000 DNAmarker；1-8：转化子的菌液 PCR（pPIC9K-BbeapA-F/R）；图 B：M：2000 DNAmarker；1-8：转化子的菌液 PCR（pPICZαA-BbeapA-F/R）；Fig.3.2 Bacterial liquid PCR detection of transformants图 A: M: 2000 DNAmarker; 1-8: Bacterial liquid PCR products of transformants (pPIC9K-BbeapA-F/R)图 B: M: 2000 DNAmarker; 1-8: Bacterial liquid PCR products of transformants (pPICZαA-BbeapA-F/R)3.3.3 生物信息学分析3.3.3.1 碱基突变位点分析及氨基酸序列多重比对将球孢白僵菌 GXsk1011 菌株的 endothiapepsin-like 蛋白与其同源的天冬氨酸蛋白酶的氨基酸序列进行多重序列比对，比对结果发现在 GXsk1011 菌株的endothiapepsin-like 蛋白的 C 端保守结构位点的一个氨基酸发生了突变，由 Ser/Th变为 Gly，如图 3.3 红色圆圈所示。
图 3.4 Endothiapepsin-like 蛋白的 N-糖基化位点预测Fig.3.4 Prediction of the N-glycosylation site of endothiapepsin-like3.3.3.4 Endothiapepsin-like 蛋白的三维结构以 栗 疫 菌 的 endothiapepsin （ PDB ID: 5hct ） 蛋 白 作 为 模 板 ， 利 用SWISS-MODEL 在线预测 endothiapepsin-like 蛋白的三维结构，侧视图和直视图如图 3.5 所示，endothiapepsin-like 蛋白催化位点 Asp89和 Asp276用红色进行了标记。
本文编号：3638220
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BbeapA的PCR扩增产物A：M：2000DNAmarker；1：pPIC9K-BbeapA-F/R引物的PCR扩增产物；
图 3.2 转化子的菌液 PCR 检测图 A：M：2000 DNAmarker；1-8：转化子的菌液 PCR（pPIC9K-BbeapA-F/R）；图 B：M：2000 DNAmarker；1-8：转化子的菌液 PCR（pPICZαA-BbeapA-F/R）；Fig.3.2 Bacterial liquid PCR detection of transformants图 A: M: 2000 DNAmarker; 1-8: Bacterial liquid PCR products of transformants (pPIC9K-BbeapA-F/R)图 B: M: 2000 DNAmarker; 1-8: Bacterial liquid PCR products of transformants (pPICZαA-BbeapA-F/R)3.3.3 生物信息学分析3.3.3.1 碱基突变位点分析及氨基酸序列多重比对将球孢白僵菌 GXsk1011 菌株的 endothiapepsin-like 蛋白与其同源的天冬氨酸蛋白酶的氨基酸序列进行多重序列比对，比对结果发现在 GXsk1011 菌株的endothiapepsin-like 蛋白的 C 端保守结构位点的一个氨基酸发生了突变，由 Ser/Th变为 Gly，如图 3.3 红色圆圈所示。
图 3.4 Endothiapepsin-like 蛋白的 N-糖基化位点预测Fig.3.4 Prediction of the N-glycosylation site of endothiapepsin-like3.3.3.4 Endothiapepsin-like 蛋白的三维结构以 栗 疫 菌 的 endothiapepsin （ PDB ID: 5hct ） 蛋 白 作 为 模 板 ， 利 用SWISS-MODEL 在线预测 endothiapepsin-like 蛋白的三维结构，侧视图和直视图如图 3.5 所示，endothiapepsin-like 蛋白催化位点 Asp89和 Asp276用红色进行了标记。
本文编号：3638220
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