家蚕Bmo-miR-34在脂肪体自噬发生过程中的功能研究
发布时间：2022-05-03 01:54
MicroRNAs（miRNAs）是一类非编码的长约21-25 nt的单链小RNA分子,普遍存在于各种生物中。miRNA可通过与其靶基因mRNA的特异性结合,引起靶基因mRNA的降解或抑制蛋白的合成,从而参与调节细胞的生命活动进程。miRNA功能研究通过对miRNA过表达或抑制,分析miRNA及其靶基因的表达和功能。查询miRNA数据库——miRBase得知,家蚕（Bombyx mori,Bmo）中已有大量的miRNAs序列被发现。序列同源性比对发现在其他物种中也存在大量miRNAs,其数量远未达到饱和。目前,已有大部分的miRNA通过生物信息学方法被发现,但对家蚕中miRNAs的功能研究相对较少。细胞自噬对生物体生长、发育、疾病发生与控制等都有着重要意义,但是在高等动物研究中还存在许多未知的领域。家蚕作为鳞翅目昆虫的模式生物与哺乳动物基因组相比,家蚕基因组相对简单且个体较大,基因组全长为450 M左右,共有28对染色体,是研究昆虫变态发育的理想材料本研究以与家蚕自噬相关Bmo-miR-34为研究对象,根据生物信息学方法预测出该miRNA潜在的靶基因。首先通过双荧光素酶报告基因载体检测...
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 miRNA的研究
1.1.1 miRNA的发现
1.1.2 家蚕miRNA的研究进展
1.1.3 miRNA的合成
1.1.4 miRNA的作用机制
1.2 自噬的研究
1.2.1 细胞自噬概述
1.2.2 细胞自噬调控机制
1.2.3 家蚕细胞自噬研究现状
1.3 研究的目的和意义
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 主要实验仪器
2.3 主要实验试剂及溶液配制
2.3.1 主要实验试剂
2.3.2 常用溶液配制
2.4 主要实验方法
2.4.1 载体构建方法
2.4.2 双荧光素酶报告基因体系检测方法
2.4.3 细胞瞬时过表达荧光载体的检测
2.4.4 个体注射过表达或抑制miRNA
第三章 结果与分析
3.1 双荧光素酶报告基因体系检测
3.1.1 Atg1/pMD19-T载体构建
3.1.2 Atg1/psiCHECK2载体构建
3.1.3 双荧光素酶活性检测
3.2 细胞瞬时过表达荧光载体的检测
3.2.1 20E诱导自噬发生
3.2.2 Bmo-miR-34转染BmN细胞时间优化
3.2.3 Bmo-miR-34转染BmN细胞实验
3.2.4 ATG8在BmN细胞中的表达
3.3 个体实验
第四章 结论与讨论
4.1 结论
4.1.1 Bmo-miR-34通过与靶基因的互作抑制报告基因荧光素酶活性
4.1.2 Bmo-miR-34影响20E诱导的BmN细胞自噬的发生
4.1.3 Bmo-miR-34的过表达或抑制影响脂肪体自噬发生
4.2 讨论
4.3 研究展望
参考文献
附录
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕miR-301对化学感受蛋白基因csp9表达的调控[J]. 杨娟娟,王远卓,魏博帆,邢秋婷,阚云超,乔惠丽. 昆虫学报. 2018(10)
[2]HIPK3基因3’UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与靶向miR-146的验证[J]. 杨开雯,强郑,靳文雨,刘昉. 基础医学与临床. 2018(04)
[3]FBXO47 3’-UTR双荧光素酶报告载体构建及与miR-33b-5p靶向验证[J]. 杨晓燕,谢聃,赵倩,尹华丽,雷小勇,甘润良. 生物技术. 2018(01)
[4]靶向调控飞蝗表皮代谢相关基因的miRNA的鉴定与分析[J]. 王艳丽,杨美玲,马恩波,张建珍. 昆虫学报. 2017(03)
[5]双荧光素酶报告基因系统鉴定has-miR-577和has-miR-583对FGF-21基因的靶向调控[J]. 张玫,何訸,宋昊岚,周君,黄亨建,应斌武,安振梅. 四川大学学报(医学版). 2016(06)
[6]Nfic基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证[J]. 王珊,李晓霞,周杰,王宝利. 天津医药. 2016(09)
[7]家蚕miR-0001和miR-0015体外下调BmFib-L基因的表达（英文）[J]. Chen CHEN,Yang-yang FAN,Xin WANG,Fei SONG,Tao JIANG,Ping QIAN,Shun-ming TANG,Xing-jia SHEN. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2016(02)
[8]家蚕非编码RNA在神经系统中的表达分析[J]. 王立方,乔惠丽,吴博,张丹,阚云超,李丹丹. 昆虫学报. 2015(08)
[9]家蚕Bmo-miR-2739对丝素重链基因Fib-H表达的调控作用[J]. 宋菲,王欣,钱平,唐顺明,赵巧玲,郭锡杰,沈兴家. 蚕业科学. 2014(03)
[10]蜕皮激素与其受体EcR-USP的转录调控机制[J]. 李康,李胜,曹阳. 昆虫学报. 2011(08)
本文编号：3650394
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 miRNA的研究
1.1.1 miRNA的发现
1.1.2 家蚕miRNA的研究进展
1.1.3 miRNA的合成
1.1.4 miRNA的作用机制
1.2 自噬的研究
1.2.1 细胞自噬概述
1.2.2 细胞自噬调控机制
1.2.3 家蚕细胞自噬研究现状
1.3 研究的目的和意义
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 主要实验仪器
2.3 主要实验试剂及溶液配制
2.3.1 主要实验试剂
2.3.2 常用溶液配制
2.4 主要实验方法
2.4.1 载体构建方法
2.4.2 双荧光素酶报告基因体系检测方法
2.4.3 细胞瞬时过表达荧光载体的检测
2.4.4 个体注射过表达或抑制miRNA
第三章 结果与分析
3.1 双荧光素酶报告基因体系检测
3.1.1 Atg1/pMD19-T载体构建
3.1.2 Atg1/psiCHECK2载体构建
3.1.3 双荧光素酶活性检测
3.2 细胞瞬时过表达荧光载体的检测
3.2.1 20E诱导自噬发生
3.2.2 Bmo-miR-34转染BmN细胞时间优化
3.2.3 Bmo-miR-34转染BmN细胞实验
3.2.4 ATG8在BmN细胞中的表达
3.3 个体实验
第四章 结论与讨论
4.1 结论
4.1.1 Bmo-miR-34通过与靶基因的互作抑制报告基因荧光素酶活性
4.1.2 Bmo-miR-34影响20E诱导的BmN细胞自噬的发生
4.1.3 Bmo-miR-34的过表达或抑制影响脂肪体自噬发生
4.2 讨论
4.3 研究展望
参考文献
附录
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕miR-301对化学感受蛋白基因csp9表达的调控[J]. 杨娟娟,王远卓,魏博帆,邢秋婷,阚云超,乔惠丽. 昆虫学报. 2018(10)
[2]HIPK3基因3’UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与靶向miR-146的验证[J]. 杨开雯,强郑,靳文雨,刘昉. 基础医学与临床. 2018(04)
[3]FBXO47 3’-UTR双荧光素酶报告载体构建及与miR-33b-5p靶向验证[J]. 杨晓燕,谢聃,赵倩,尹华丽,雷小勇,甘润良. 生物技术. 2018(01)
[4]靶向调控飞蝗表皮代谢相关基因的miRNA的鉴定与分析[J]. 王艳丽,杨美玲,马恩波,张建珍. 昆虫学报. 2017(03)
[5]双荧光素酶报告基因系统鉴定has-miR-577和has-miR-583对FGF-21基因的靶向调控[J]. 张玫,何訸,宋昊岚,周君,黄亨建,应斌武,安振梅. 四川大学学报(医学版). 2016(06)
[6]Nfic基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证[J]. 王珊,李晓霞,周杰,王宝利. 天津医药. 2016(09)
[7]家蚕miR-0001和miR-0015体外下调BmFib-L基因的表达（英文）[J]. Chen CHEN,Yang-yang FAN,Xin WANG,Fei SONG,Tao JIANG,Ping QIAN,Shun-ming TANG,Xing-jia SHEN. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2016(02)
[8]家蚕非编码RNA在神经系统中的表达分析[J]. 王立方,乔惠丽,吴博,张丹,阚云超,李丹丹. 昆虫学报. 2015(08)
[9]家蚕Bmo-miR-2739对丝素重链基因Fib-H表达的调控作用[J]. 宋菲,王欣,钱平,唐顺明,赵巧玲,郭锡杰,沈兴家. 蚕业科学. 2014(03)
[10]蜕皮激素与其受体EcR-USP的转录调控机制[J]. 李康,李胜,曹阳. 昆虫学报. 2011(08)
本文编号：3650394
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3650394.html
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